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细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒

产品信息：

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产品描述：

 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒（Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit）采用了经典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法对细胞周期与细胞凋亡进行分析。

碘化丙啶 (Propidium，PI) 是一种双链DNA荧光染料，其嵌入双链DNA后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，根据DNA含量的分布情况，进行细胞周期和细胞凋亡分析。

PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化 (DNA fragmentation) 导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞PI染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。

细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。 细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。凋亡前期，染色质皱缩，细胞密度增加，前向角光散射色显著降低。凋亡后期，细胞产生凋亡小体，前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

本试剂盒通常应用于贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

运输与保存方法:

运输：冰袋（wet ice）运输。

保存方法：-20℃避光保存，有效期为2年。

【注】如果需要在短时间内多次重复使用，可以于4℃避光保存，2个月内有效。

注意事项：

1）本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。

2）细胞处理需轻柔，尽量避免人为的损伤细胞。

3）为防止不同批次细胞在实验时所处周期不同导致重复性差，可以在实验前进行细胞的同步化处理。实验细胞应处于对数

生长期，贴壁细胞一般在50～80%汇合度时收集为宜。

4）400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉，留下单细胞，否则会出现人为的多倍体干扰。如果没有条件过滤，请在染色之前将细胞轻弹以分散，再进行染色。

5）荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

6）操作碘化丙啶时，应注意防护，保护眼睛、避免吸入。

7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

8) 本产品仅作科研用途！

产品使用方法：

1）细胞样品制备：细胞数量控制在1×105~1 × 106个。

a）贴壁细胞：小心吸除细胞培养液，用胰酶消化细胞，制备成单细胞悬液。1000 g离心5 min，沉淀细胞，弃上清，用1 mL预冷的PBS润洗细胞一次，离心收集细胞。

b）悬浮细胞：1000 g离心5 min，沉淀细胞，小心吸除上清。加入1 mL预冷的PBS，重悬细胞，再次离心收集细胞。

c）组织细胞：将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后，用0.25%的胰酶消化0.5-1 h，经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000 g离心5 min，沉淀细胞。加入1 mL预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。如组织难以消化，可加入适量胶原酶。

2）细胞固定：细胞沉淀用1 mL预冷的70%乙醇轻轻混匀，4℃固定2 h以上或者过夜。接下来1000 g，离心5 min沉淀细胞后，用1 mL预冷的PBS重悬。然后再次1000 g离心5 min沉淀细胞。

3）染色：

在0.5 mL染色缓冲液(40301-C)中加入10 μL 碘化丙啶储液（40301-B）和10 μLRNase A（40301-A）溶液，混匀待用。每个细胞样品加入0.5 mL配置好的碘化丙啶染色液，轻轻混匀重悬细胞。37℃避光孵育30 min，就可以进行流式检测，流式检测最好在5 h内完成。

【注】：配置好的PI染色液在短时间内可以4℃保存，宜当日使用。

4. 流式检测和分析：细胞用400目筛网过滤，用流式细胞仪进行检测，在激发波长488 nm波长处检测，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。