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收藏Ni-Crystarose FF介质的特点是:
a 刚性强、流速快、载量高。
b 镍离子脱落极低,通常在正常使用寿命内几乎不需要再鳌合镍离子。
c 亲和特异性更强,兼容复杂样品(如比较糟糕的细胞培养液)
d 非特异性吸附更低、几乎无需洗杂步骤,使用寿命更长。
e 特异性更强,纯度更高,载量更高,但洗脱 咪唑浓度可以更低。
f 试剂兼容性广,可兼容还原剂和EDTA。
g无需脱镍直接用氢氧化钠CIP,减少步骤,减少污染,生产放大更容易。
h该填料可以从含有高达5mM EDTA2Na中抓取含有His-tag蛋白,再加上极高的特异性,即使在非常糟糕的细胞培养液中纯化目的蛋白也可以达到无可比拟的纯化效果,且不需要脱镍就可以直接用0.5M的氢氧化钠在线CIP,解决了其他镍亲和填料(金属螯合层析填料)需要脱镍在清洗的弊端,而且使用寿命更长,载量更高。
表1.介质技术指标
| 基质 | 高度交联6%琼脂糖 |
| 平均颗粒大小 | 90um |
| 颗粒粒径范围 | 45um—165um |
| 配基浓度 | 15umol Ni2+/ml胶 |
| 动态载量 | >40mg/ml His蛋白(MW32kd protein), >60mg(MW15kd protein) |
| 缓冲溶液 | 所有常规缓冲溶液 |
| 化学稳定性 | 所有常用缓冲试剂;0.5M NaOH; 0.01M HCL40℃放置一周; 1M NaOH、70%乙酸放置12h;2%SDS、30%异丙醇1h。 |
| PH稳定性(较长期) | 3---12 |
| CIP稳定性(短时间) | 2---14 |
| 最大压力 | 0.4Mpa |
| 最大流速/推荐流速 | 750cm/h/150cm/h |
| 储存液 | 20%乙醇 |
| 存储温度 | 0---30℃ |