1. 产品介绍 SP Seplife® FF 层析介质是蓝晓科技自主研发的一种新型高度交联的琼脂糖层析介质，是将 磺酸基丙基键合在琼脂糖凝胶过滤层析介质上形成的一种强阳离子交换层析介质，具有高流速、 低反压、高动态载量、良好的化学稳定性和机械性能，非特异性吸附低，回收率高，方便进行 规模放大，可缩短生产时间，提高生产效率。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸 及多肽的离子交换分离。

3.使用方法 
3.1 装柱 装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。 3.2 平衡 使用 2~5倍柱床体积的上样平衡液平衡柱子，务必使流出液的电导和 pH同上样缓冲液的电 导和 pH完全一致。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如 NaAC、PBS等。常用的平衡液是 0.1mol/L 醋酸缓冲液，pH5.0。 3.3 上样 （1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。 （2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目 标产品。 （3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和 pH 值。盐 浓度小，介质对样品组分吸附较牢。一般推荐的 pH值是大于目标产品等电点 1个单位。 3.4 洗脱 可用增大盐浓度或增大 pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。常用的洗脱液（B液） 如：0.1mol/L 醋酸缓冲液+2mol/L NaCl，pH5.0。 3.5 再生 一般先用高盐浓度的缓冲液（含 1~2mol/L NaCl）洗或减小 pH洗 10倍以上柱体积，然后用 结合蛋白时的平衡液洗到平衡即可。 若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。 3.6 在位清洗 （1）对于以离子键结合上去的蛋白，可用 0.5~1倍柱床体积的 2M NaCl去除。（2）对于沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白或脂类，可以先用 1 倍柱床体积的 0.1M NaOH 冲 洗，再用平衡缓冲溶液清洗直至 pH呈中性。 （3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用 4~10倍柱床体积的 70%乙醇或 30%异丙醇清洗， 需注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。 3.7 存储 密封保存在 4~30℃（保存溶液为 20%乙醇+0.2mol/L乙酸钠）干燥、通风、清洁处，不可 冷冻；用过的柱子保存在 4~8℃，20%乙醇溶液+0.2mol/L乙酸钠中。 3.8 运输 运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。 

4.注意事项 （1）柱的选择：从理论上说，只要柱足够长，就可以获得理想的分辨率，但由于层析柱流 速同压力梯度有关，柱长增加使流速减慢，峰变宽，分辨率降低；柱的直径增加，使液体流动 的不均匀性增加，分辨率明显下降。 （2）纯化过程必须严格控制洗脱缓冲液的 pH及离子强度。样品与层析介质必须用平衡缓 冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。 （3）所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。 （4）洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。 （5）上样的体积要小，浓度不宜过高。 （6）加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。