1.产品介绍 Seplife® LXPM DEAE 5504M 层析介质是以聚丙烯酸酯为基质，在表面进行了亲水性改性 再键合了弱碱性离子交换基团，具有载量高、化学稳定性好、机械强度大、非特异性吸附小等 特点，具有卓越的生物相容性和柱床稳定性，可以提供更快的流速，特别适合大规模制备的应 用，显著提高了下游纯化工艺的生产效率，可以降低成本，创造较好的经济效益，广泛应用于 抗体、蛋白质、多肽、核酸（寡核苷酸）、病毒，胰岛素等生物分子的捕获、中度纯化、精细 纯化。

3.使用方法： 3.1 装柱 匀浆浓度等于静置胶体积除以除以匀浆后的总体积。采用 0.5M NaCl 匀浆可获得最佳装柱效 果，其浓度为 60%-70%。方法如下： 1)色谱柱的柱体积 V，V=Ac×L，Ac=π×r 2。 Ac：色谱柱横截面积；L:色谱柱高度；r：色谱柱半径。 2) 搅动介质形成匀浆液，量取所需质量或体积。其为柱体积的 1.2 倍左右，防止收缩。 3）用 0.5 M NaCl 溶液置换 20%乙醇，平衡过夜。 4）装柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液调整匀浆浓度为 65 ~ 70%；将匀浆一次性倒入层析柱，沉 降平衡后标注高度。 5）将分配器装入，调节高度使得压缩系数为 1.05 ~ 1.10；然后启动输液泵，用 1.5~2 倍工 作流速使柱床稳定。 6）按照 SOP 进行柱效和对称性的测定，须达到预定标准。 3.2 柱效评价 装好之后，色谱柱用 3-5 体积超纯水清洗。100cm/h 流速平衡并进行柱效测试。 离子交换层析柱的柱效测试方法 样品： 2 M NaCl 溶液 上样量： 1~5 % 柱体积 洗脱液： 0.5 M NaCl 溶液 线性流速： 100 cm/h 检测： UV @ 280 nm ,2 M NaCl 上样：电导检测仪 3.3 清洗 装好的色谱柱应使用至少使用 5BV 的去离子水清洗。 3.4 平衡 使用适当的 5-10 倍柱体积缓冲液进行柱子的平衡，至流出液电导和 PH 不变（与平衡液一致），缓冲液 如 Buffer A，如 20 mM PBS, pH7.0，具体的缓冲体系应根据目标蛋白的稳定性 和等电点、离 子交换介质的种类进行筛选和优化。 3.5 上样 固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平 衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或膜过滤处理。进料量根据介质的载量和料液 中目标蛋白的含量计算，上样前确保样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。 3.6 洗脱 上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线稳定，可以根据实际情况采取提高盐浓度或改变 流动相 pH 的方法依次洗脱吸附于层析介质上的样品。 3.7 再生 每次层析之后可用 0.5-2 M NaCl 清洗层析柱，除去强结合于层析介质上的蛋白。 3.8 在位清洗 为了保持层析柱的性能，若有蛋白质或其他杂质在再生过程中未能有效去除，可执行在位 清洗步骤，在位清洗时，也可采用反向冲洗的方法，具体操作步骤如下： （1）对于通过离子键结合过强的蛋白，可用 3BV 以上的 2M NaCl 清洗，并用 3BV 以上 的去离子水清洗； （2）对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂蛋白，可用 0.2~0.5 M NaOH 清洗（与层析介 质接触时间 1~2 h），并用 5BV 以上平衡液和 3BV 以上的去离子水清洗； （3）对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用 5BV 以上的 50%乙醇或 30%异丙 醇 清洗（与层析介质接触时间 0.5-1 h），并用 5 BV 以上的去离子水清洗。也可用含非离子 表面活性剂的碱性或酸性溶液清洗，如 0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M 乙酸清洗 1-2 h，并用 5BV 以上的 50%乙醇冲洗去除去污剂，然后用 5BV 以上的纯水冲洗（使用高浓度的有机溶剂时， 为了避免产生气泡，应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法）。 3.9 应用案列 （1）5ml Seplife® LXPM DEAE 5504M 预装柱 （2）样品：20 mg/ml 糜蛋白酶（粗品） （3）波长：280nm，流速：3ml/min（4）洗脱：缓冲液 A1：50mMTris-HCL 溶液，pH10.0 缓冲液 B1：50mMTris-HCL 溶液+1M NaCL，pH10. （5）洗柱溶液：1 M NaOH 溶液 超纯水