说明
RNase A/T1 Mix综合有RNase A和RNase T1的RNA降解活性。RNase?�A可特异性水解RNA的C和U残基;RNase T1特异性水解RNA的G残基,见图1 (1)。
浓度
2 mg/ml (相当10000 u/ml (200 Kunitz u/ml)) RNase A;
5000 u/ml RNase T1。
来源
RNase A:牛胰腺。
RNase T1:大肠杆菌细胞,含有来源于米曲霉(Aspergillus oryzae )的克隆基因rntA 。
RNase A活性单位定义
1个活性单位是指37°C (pH 5.0)条件下,酵母RNA溶液水解导致其260 nm波长吸光值增加1.0所需的酶量。
50 units大致相当于1?�Kunitz unit (3)。
RNase T1活性单位定义
1个活性单位是指37°C(pH 7.5)条件下,酵母RNA溶液水解15分钟使其260 nm波长吸光值增加1.0所需的酶量。
保存缓冲液
保存缓冲液组分:
50 mM Tris-HCl (pH 7.4)和50% (v/v)甘油。
质量控制
相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、蛋白酶污染。功能检测方法为质粒DNA纯化过程中的RNA降解。
抑制与失活
- 抑制剂:目前最有效的抑制剂是哺乳动物核糖核酸酶抑制剂,如Ribolock™ RNase Inhibitor (#EO0381)。其它抑制剂:尿苷2’,3’-环钒酸盐、5’-双磷酸腺苷3’-磷酸盐和5’-双磷酸腺苷2’-磷酸盐(2)、SDS、焦碳酸二乙酯(DEPC)、4 M异硫氰酸胍加上0.1M 2 -巯基乙醇、重金属离子等。
- 失活:加热不能使之失活,建议采用过柱法或苯酚/氯仿抽提除去该酶混合物。