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phi29 DNA Polymerase

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品牌 Thermo Scientific

地区 -

货号 EP0091

产地进口

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产品规格

品牌名称

Thermo Scientific

货号

EP0091

国产/进口

进口

规格

图文详情

- 热失活65°C, 10 min
- 重组酶

Catalog#	Size, concentration	Supplied with:	Certificate of Analysis	MSDS
Catalog#	Size, concentration	10X Reaction Buffer	Certificate of Analysis	MSDS
EP0091	2.5 µg; 250 u (0.1 µg/µl); (10 u/µl)	0.25 ml	EP0091
EP0092	10 µg; 1000 u (0.1 µg/µl); (10 u/µl)	1.00 ml	EP0092
EP0094	50 µg; 5000 u (0.1 µg/µl); (10 u/µl)	5 x 1.00 ml	EP0094

Features

在所有已知的聚合酶中，具有最高的合成持续性和链置换活性。最长可合成70 kb长度的DNA片段(1)。
高准确性DNA合成(5)。
高产量扩增DNA，即使微量模板也能高效扩增。
扩增产物可直接用于下游应用，如PCR、限制酶切、SNP基因分型等。

Applications

滚环复制(RCA) (6)：定期制备DNA 模板(7)。
多重置换扩增(MDA) (8)。
全基因组非偏好性扩增(WGA)，见图1：
一 DNA扩增，SNP (9)和STR (10)检测；
一从单细胞(11, 12)、致病生物或宏基因组(13)中无细胞扩增DNA；
一从滤纸的血迹标本(14)扩增DNA。
测序DNA模板制备。
蛋白引物介导的DNA扩增(15)。
锁式探针原位基因型分析(17)。
重组克隆(18)。
无细胞克隆致死性DNA (19)。
RNA-primed DNA 扩增 (16)。

说明

phi29 DNA Polymerase是一种高持续扩增能力的聚合酶(最长达70 kb)，具有很强的链置换活性，适合高效的等温DNA扩增(1)。此外，phi29 DNA Polymerase还具有单链DNA偏好的3’→5’外切酶(校正)活性(2)，因此重点推荐使用3’-端修饰的引物 (4)。

来源

大肠杆菌菌株，含有Bacillus subtilis 噬菌体phi29来源的克隆基因2。

分子量

66.7 kDa，单体。

活性单位定义

1个活性单位是指在30°C、10分钟内将0.5 pmol dCMP合成掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。

酶活性分析混合物：50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl₂ , 1 mM DTT, 0.01 mg/ml lambda DNA/HindIII, 0.2 µM dCTP (含[³ H]-dCTP), 0.2 mM dATP, 0.2 mM dGTP, 0.2 mM dTTP.

特异性活性

100,000 u/mg

保存缓冲液

保存缓冲液组分：
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20和50% (v/v)甘油。

10X 反应缓冲液

330 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 100 mM Mg-acetate, 660 mM K-acetate, 1% (v/v) Tween 20, 10 mM DTT。

质量控制

测试表明无内切脱氧核糖核酸酶污染。

抑制与失活

抑制剂：aphidicolin, N² -(p-n -butylphenyl)-dGTP (BuPdGTP), 2-(p-n -butylanilino)-dATP (BuAdATP) (20)。
失活：65°C加热10分钟。

备注

含有phi29 DNA Polymerase的反应体系中加入PPase (#EF0221)可增加DNA合成量(8)。

Notice

Use of this enzyme in certain applications may be covered by patents and may require a license.

图1。phi29 DNA Polymerase催化非偏好性扩增人类基因组DNA。
根据Dean et al., 2002 (9)的流程，phi29 DNA Polymerase扩增100拷贝(0.33 ng)人类基因组DNA。计算放射性[alfa-³ 3P]-dATP渗入DE-81可吸收形式，定量分析扩增的总DNA。不同染色体上基因的扩增效率通过实时PCR仪器(ABI 7700)检测。

技术文档

赛默飞mRNA疫苗整体解决方案.pdf

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创新药出海白皮书.pdf

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化学药物分析整体解决方案.pdf

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中药分析完整解决方案.pdf

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赛默飞细胞与基因治疗整体解决方案.pdf

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