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10X | 单细胞 RNA 测序
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10X Genomics 公司的 Chromium 系统利用 8 通道的微流体“双十字”交叉系统,将含 barcode 的凝胶珠(Gel Beads)、细胞和酶的混合物、油三者混合,形成 GEMs(油包水的微体系)。GEMs 形成后,细胞裂解,凝胶珠自动溶解释放大量 barcode 序列,随后 mRNA 逆转录产生带有 10X barcode 和 UMI 信息的 cDNA,构建标准测序文库,其中 10X barcode 用于区分细胞,UMI 用于区分 mRNA 分子。
技术服务 研发实验室
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品牌 SHBIO
地区 中国,上海,上海市
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产地 国产
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伯豪生物
上海伯豪生物技术有限公司
上海市浦东新区张江镇李冰路151号
营业执照已审核
上海伯豪生物技术有限公司(简称:伯豪生物,英文名:Shanghai Biotechnology Corporation)2008 年 12 月成立,是生物芯片国家工程研究中心的有机组成部分,专注于提供专业的生物医药和疾病诊断创新技术、产品和优质服务。 伯豪生物自成立以来获得了国家基因检测技术应用示范中心、国家工信部专精特新“小巨人”企业、院士专家工作站、高新技术企业、上海市研发公共服务平台(负责“上海市高通量疾病标志物服务平台”和“上海市基因芯片专业服务平台”的运营)、上海市服务外包公共平台、上海科技小巨人企业、浦东新区企业研发机构、联合实验室建设等一系列资质,拥有医疗机构执业许可证、医疗器械经营许可证。 伯豪生物于 2016 年入选国家发展和改革委员会首批基因检测技术应用示范中心,与复旦大学附属肿瘤医院、上海市胸科医院、上海市儿童医院、上海生物信息技术研究中心等单位共同承担运行“高发肿瘤及遗传性疾病基因检测示范中心”。 伯豪生物建立了规范化的质量控制体系,通过了 ISO9001:2015 质量技术体系的认证,并参照 GLP- L 的标准,通过 156 个 SOP 文件对项目、样品、实验过程、生物信息分析过程、数据信息管理、保密等进行严格质控。 伯豪生物自成立以来累计技术服务 15 年有余,承接项目数超 50000 个,用户单位 5000 家以上,累计处理样品超过 30 万份,协助客户发表论文 2500 余篇,总影响因子(IF)超 18000 分,平均影响因子(IF)大于 7.2 分。全面推动中国基因组学服务产业发展。可靠的质量已经得到了国内及国际科研领域的认可!伯豪生物秉承着“服务科技创新,护航人类健康!”的使命,为每一位伯豪生物客户提供专注、专业、高效的科研技术服务。 伯豪生物经过十多年不断投入和持续打造,伯豪生物已经成长为一家硬件精良,人才合理,技术专业,管理规范,理念先进,符合国际标准的以技术开发和技术服务见长的生物技术公司。
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10X Genomics 公司的 Chromium 系统利用 8 通道的微流体“双十字”交叉系统,将含 barcode 的凝胶珠(Gel Beads)、细胞和酶的混合物、油三者混合,形成 GEMs(油包水的微体系)。GEMs 形成后,细胞裂解,凝胶珠自动溶解释放大量 barcode 序列,随后 mRNA 逆转录产生带有 10X barcode 和 UMI 信息的 cDNA,构建标准测序文库,其中 10X barcode 用于区分细胞,UMI 用于区分 mRNA 分子。

单细胞 RNA 测序 10Xgenomics 技术原理

                                                            图 10X genomics 技术原理

 

伯豪优势 3
 

1、通量高: 一张芯片具有 8 个独立的通道,可供 8 个样本同时上机,每个通道可捕获 10000 个细胞。

2、捕获率高: 单细胞捕获效率高达 65%,多细胞比例 <0.9%(1,000 个细胞中)。

3、延展性强: 除了获得单细胞 mRNA 的信息,还提供了单细胞 TCR/BCR、单细胞表面蛋白、单细胞 ATAC 等多种解决方案。

 

技术参数

                                                                       文库结构

10X Genomics 3’gene expression 文库示意图

                                     图 10X Genomics 3’gene expression 文库示意图

伯豪生物提供:单细胞转录组测序、生信分析整体科研技术服务,伯豪生物单细胞转录组测序科研服务商,24 小时咨询服务热线:021-58955370

                                                                 建议测序深度及参数

指标参数
测序深度50,000~100,000 reads/cell
测序类型PE150

 

样本要求

1、类型:新鲜组织,原代细胞,细胞系等。

2、来源:血液提取、磁珠富集、流式富集、组织解离等。

3、样本量及其它质控要求:

样本类型样本质控要求
细胞悬液>105 目标细胞个数(底限 10,000 个细胞);
活率 >80%;
浓度 500-1,000 个细胞 /ul;
细胞间无粘连(成团率 <5%);
无大于 40μm 的细胞碎片或其他颗粒物;
不存在逆转录抑制剂和非细胞的核酸分子。
血液EDTA 抗凝的全血(不可肝素抗凝),>5ml。
组织0.3cm×0.3cm(不超过 0.5cm×0.5cm)的新鲜组织,4~5 块。

4、保存运输:

(1)细胞悬液:建议现场制备,如要运输,建议使用伯豪生物自主研发的单细胞保护液,4°C 运输,48 小时内送达伯豪生物实验室。

(2)血液:EDTA 抗凝的全血,4°C 运输,2 小时内送达伯豪生物实验室;或提取 PBMC 后冻存,干冰运输。

(3)组织:建议使用伯豪生物自主研发的单细胞组织保护液,4°C 运输,48 小时内送达伯豪生物实验室。

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