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收藏细胞转染,是将外源分子(如 DNA,RNA 等)导入真核细胞中的一种技术;
转染分为:瞬时转染和稳定转染
瞬时转染:指外源 DNA 或 RNA 转入宿主细胞后不整合到宿主染色体中进行外源目的基因的表达
稳定转染:指外源 DNA 转入宿主细胞后将外源目的基因整合到宿主染色体中进行表达
稳定转染的特点:
1. 目的基因整合到染色体上,需要使用线性 DNA(线性 DNA 虽然比超螺旋状的 DNA 转入量低,但整合率高)
2. 外源 DNA 整合到宿主细胞染色体中大约为 1%,通常需要通过一些选择性标记反复筛选,才能得到稳定转染的同源细胞系
3. 随宿主细胞基因组复制、转录、翻译,并被稳定遗传
4. 用于获得稳定表达的外源基因的单细胞克隆:如大规模蛋白质的合成,长期的药理学研究遗传机制的研究等
稳定细胞株:一般是将外源 DNA 克隆到具有某种抗性或者选择基因的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中,用载体中所含的选择标志进行筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白的细胞株

稳定细胞株构建流程
高质:外源基因严格鉴定,细胞来源清晰,无污染
高产:重组蛋白 / 抗体表达量可快速优化至 2g/L 以上稳定表达
稳定:独有的 GS 稳转系列载体配合 MSX 药物筛选,实现稳定传代 15 代以上
快速:筛选高产细胞株,周期短至 3 个月
灵活定制:可针对重组蛋白 / 抗体全长或片段进行个性化表达
经验丰富:专业的技术团队,已成功为国内外多家医药公司和研究单位构建交付稳定细胞株
多筛选系统:G418/ 潮霉素 / 嘌呤霉素筛选系统,GS/DHFR 双基因筛选系统等

构建生产重组抗体的CHO稳定细胞株

