服务简介

毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是近年来发展迅速、应用广泛的一种真核表达系统。它是甲醇营养型酵母菌，有两个乙醇氧化酶(Alcohol oxidase，AOX)编码基因AOX1和AOX2，两者序列相似，AOX1基因严格受甲醇诱导和调控。当甲醇为唯一碳源时，AOX1启动子可被甲醇诱导，启动乙醇氧化酶的表达，从而用甲醇进行代谢，含AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。

主要优势：

1.含有特有的强有力的AOX(醇氧化酶基因)启动子，用甲醇可严格地调控外源基因的表达

2.产物易分离，毕赤酵母所用发酵培养基十分廉价，一般碳源为甘油或葡萄糖及甲醇，其余为无机盐，培养基中不含蛋白，有利于下游产品分离纯化

3.外源蛋白基因遗传稳定，外源基因能以高拷贝数整合到毕赤酵母基因组中，不易丢失并能够得到高表达菌株

4.作为真核表达系统，毕赤酵母具有真核生物的亚细胞结构，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能

表达类型载体名称筛

服务优势

1.具有完备的毕赤酵母表达平台，可以根据蛋白特性或客户需求设计不同的实验方案

2.具有高通量筛选平台，可以快速有效地获得最佳表达条件

3.具有大规模发酵生产的能力

服务内容

服务内容客户提供服务步骤服务周期交付内容毕赤酵母表达蛋白基因序列

载体

菌株基因合成，密码子优化2-4周蛋白样品

技术服务报告

亚克隆1周蛋白表达测试，高通量筛选2-3周发酵纯化1-2周

案例展示

案例1：

蛋白A全长基因合成后亚克隆至表达载体pPICZαA，转化毕赤酵母菌株X33，蛋白分泌表达成功(28kDa;C端6*His)，产量7mg/L，纯度大于90%，质检图如下：

蛋白A 纯化质检图（Reduced SDS-PAGE）

案例2：

蛋白B基因合成后亚克隆至表达载体pPIC3.5K分别转化毕赤酵母菌株GS115/KM71进行胞内表达，SDS-PAGE检测结果显示蛋白B(糖基化后40kDa)有明显表达，其中克隆GS115-5#(24h，0.5%甲醇)，GS115-2#(48h，1%甲醇)，GS115-3#(48h，1%甲醇)都能成功表达目的蛋白。

蛋白 B 表达测试图（Reduced SDS-PAGE）