“一站式”类器官构建人源试剂盒（Mini Kit）产品总表

“一站式”类器官构建试剂盒分为Kit和Mini Kit两种规格

Mini Kit 试剂盒组成：

表1.1 Mini Kit规格试剂盒内包含的试剂

表1.2 Mini Kit规格试剂盒内包含的耗材

保存条件：

• 类器官完全培养基-20℃以下保存，保质期6个月。4℃保存1周。
  • 其余试剂按条件保存。

使用说明：

类器官原代构建部分：

• 清洗组织使用预冷的组织清洗液清洗组织后，将组织移至 6cm 培养皿内，除去组织周边的脂肪、结缔组织以及坏死区域。
• 组织剪碎将组织转移至 1.5mL 离心管中，用无菌剪刀剪切组织 100~200 下至组织碎块直径约 0.5~1mm大小即可。
• 组织酶解将组织悬液离心后弃上清，加入5mL 酶解液Ⅰ重悬，转移至新的 6cm 培养皿中；将培养皿放置在 37℃培养箱中酶解，每 10min 取出吹打后镜下观察，观察酶解程度。酶解至观察不到明显的组织块，显微镜下视野出现大量单细胞及小细胞团时即可终止酶解。
• 终止酶解将组织酶解悬液转移至 15mL 离心管中，补加预冷的组织清洗液至 10mL 终止酶解；离心后弃上清，加入 5mL 预冷的组织清洗液重复清洗细胞 2~3 遍。
• 细胞收集补加预冷的组织清洗液重悬细胞沉淀，采用自然沉降法收集酶解完全的细胞团，并通过 100μm细胞筛过滤，去除胞外基质杂质。将滤液转移至 15mL 离心管中，离心后弃上清。
• 红细胞裂解向细胞沉淀加入 500~1000μL 的红细胞裂解液吹打 5~10 次混匀，冰上静置 3min 后，加入 5倍体积预冷的类器官清洗液终止红细胞裂解；离心后弃上清，收集细胞沉淀。
• 细胞计数向细胞沉淀中加入 1mL 的类器官培养基（含有添加物Ⅰ），吹打混匀后吸取 10μL 细胞悬液进行活细胞检测和计数。
• 细胞种胶以 24 孔板为例，每孔种植一个 50μL 胶滴，细胞密度为 10000~50000 个/50μL 胶滴；在细胞悬液中加入等体积的基质胶，轻轻吹打混匀，快速接种到预热过的 24 孔板中心位置，正置于 37℃培养箱中孵育 5min 预固化，再将 24 孔板轻轻翻转倒置，继续在 37℃培养箱中孵育约 10min，使基质胶完全凝固。
• 维持培养待胶滴凝固后，沿孔壁缓缓加入 500μL 类器官培养基（含有添加物Ⅰ）；类器官培养 48h 后更换类器官培养基（不含添加物Ⅰ），维持培养每 2 天更换培养基，类器官培养 7~15 天内进行传代。

更多详细步骤及其他实验步骤见《类器官操作手册》

注意事项：

• 为取得最佳实验效果，尽量避免反复冻融，可适当分装后使用。
  • 本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不可用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

  • 为了实验人员安全和健康，建议实验过程中穿着实验服、佩戴口罩及一次性手套操作。