重组蛋白G磁珠（rProtein G Magnetic Beads）本产品将重组Protein G高密度氨基偶联到磁性琼脂糖微球表面，具有高载量，高特异性，高回收率和低非特异吸附的特性。可结合293/CHO细胞培养上清、杂交瘤细胞上清、小鼠腹水和血清等样本中的IgG或带有FC标签的重组蛋白。重组Protein G只保留了C1，C2和C3三个抗体特异结合的结构域，降低了非特异性吸附，因此通过一步结合和洗脱即可得到纯度大于90%的目的蛋白。

Protein G可用于纯化不能与Protein A很好结合的哺乳动物IgG。相对于Protein A，Protein G对于大多数哺乳动物的IgG有着更高的亲和力，尤其是对于人 IgG3，小鼠IgG1和大鼠 IgG2a。

Protein A和Protein G与不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力不一样，具体可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别。

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Table 1：rProtein G Magnetic Beads 参数和性能指标

Table 2：试剂和规格

使用须知

本产品须与磁性分离设备配套使用

磁珠使用前要混合震荡均匀

磁珠预处理要充分

孵育时要保持磁珠处于悬浮状态，以保持最大结合效率

在使用及保存磁珠过程中，禁止磁珠长时间干燥

禁止冷冻，离心磁珠，防止对磁珠产生不可逆的损伤

建议磁珠仅重复纯化同种蛋白

应避免磁珠因磁吸不完全导致的磁珠损耗

用后及时再生，避免将磁珠长时间置于低pH的缓冲液中，避免磁珠长菌

使用方法

• 样品预处理（以纯化1ml小鼠腹水为例，目标抗体约1-2mg）

用Wash Buffer将小鼠腹水稀释3-5倍。（杂交瘤细胞培养上清可使用Wash Buffer调节pH至7.0-8.0。）

• 磁珠预处理

颠倒混匀磁珠，吸取2mL 10%（v/v）磁珠于准备好的5ml EP管内，

放置在磁力架上，静置1min，吸弃上清；

加入与10%磁珠等体积的Wash Buffer 2ml（这里的等体积是指磁珠加保存液的总体积），取下EP管，颠倒混匀1min；

放置在磁力架上，静置1min，吸弃上清；

重复1次。

• 结合

将1ml小鼠腹水（pH7.0-8.0）用Wash Buffer稀释3倍至4ml，加入至装有磁珠的EP管中，颠倒混匀，室温缓慢旋转孵育1h（具体时间可根据结合效果调整）。

• 洗涤

将装有磁珠跟样本的EP管放置在磁力架上，静置1min，吸弃上清，加入与磁珠等体积的Wash Buffer（2ml），颠倒混匀1min，静置在磁力架1min，吸弃上清；

重复5次。

•  洗脱

加入3-5倍磁珠体积（2ml 10% v/v磁珠的磁珠体积是200ul）的Elution Buffer（600ul），室温缓慢旋转洗脱10min；

静置在磁力架上，吸走上清，得到洗脱1；

再加入3-5倍磁珠体积（2ml 10% v/v磁珠的磁珠体积是200ul）的Elution Buffer（600ul），室温缓慢旋转洗脱10min；

静置在磁力架上，吸走上清，得到洗脱2；

向洗脱的上清中加入1/10 Elution Buffer体积的Neutralization Buffer（60ul）。

分别测洗脱1和洗脱2的浓度，根据需要的抗体浓度决定是否混合。

• 磁珠再生（以再生2ml 10%v/v磁珠为例）

（1）将磁珠置于磁力架上，吸弃上清，向EP管内加入与10%磁珠等体积的Elution Buffer（2ml），室温缓慢旋转5min，静置在磁力架上，吸弃上清；

（2）向EP管内加入与10%磁珠等体积的Wash Buffer（2ml），再加入1%（v/v）TritionX-100，室温缓慢旋转10min，静置在磁力架上，吸弃上清；

（3）向EP管内加入与10%磁珠等体积的Wash Buffer（2ml），室温缓慢旋转2min，静置在磁力架上，吸弃上清，重复一次；

（4）向EP管内加入1.8ml 20%乙醇，使磁珠的浓度保持在10% (v/v) ，4℃保存。

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