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CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。Cas9核酸酶是一种RNA引导的内切酶,能催化双链DNA的断裂,这种靶向核酸酶是高精度基因组编辑的有力工具。本制品在蛋白两端分别加了核定位信号(NLS),在C端加了EGFP序列。
Cas9蛋白与Crispr/Cas9系统的导向RNA(sgRNA)组成一个高度稳定的核糖核蛋白(RNP)复合物。当Cas9带有NLS表达序列时,Cas9-RNP复合体可以在进入细胞后立即定位到细胞核,无需体内转录或翻译。此外,与其他系统相比,Cas9-RNP复合物从细胞中迅速清除,最大限度地减少了脱靶效应。EGFP通过荧光激活细胞排序(FACS),使细胞群富集以进行所需的基因组编辑,显著降低了在基因组编辑应用中单细胞克隆和基因分型的人工和成本。