牛痘病毒加帽体系利用牛痘病毒加帽酶及相关组分，将7-甲基鸟苷帽结构（m7Gppp，Cap0）加到 RNA 的 5´ 末端。在真核生物中，该结构与mRNA的稳定、转运和翻译密切相关。使用酶促反应为RNA加帽是一种简单有效的方法，且帽结构与天然Cap 0结构完全一致，能显著改善用于体外转录、转染和显微注射的RNA的稳定性和翻译能力。该酶由两个亚基（D1和D12）组成，兼具RNA三磷酸酶、鸟苷转移酶和鸟嘌呤甲基转移酶的功能，它们对于添加一个完整的Cap 0结构m7Gppp5´N都是必须的（图1）。 由牛痘病毒加帽酶构建的带帽RNA产品具有“cap 0”结构。通过在加帽反应中同时使用mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶和牛痘病毒加帽酶，Cap 0-RNA可以转化为“ cap 1”结构。 mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶通过将甲基从供体分子SAM转移到cap 0- RNA 5’端紧邻帽结构的第一个核苷酸的2'-O位置，从而从Cap 0-RNA制备Cap 1-RNA。 本体系可用于IVT RNA的加帽反应，使加帽反应在1h之内完成，效率接近100%，并且保证正确的方向。IVT推荐使用近岸蛋白质T7 High Yield RNA Transcription kit（货号：E131）。