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本试剂盒适用于qPCR荧光定量法检测DNA的甲基化。本试剂盒包含经过特殊工艺处理的Enzyme Mix以及精心优化的5×Probe qPCR Buffer II、Enzyme Mix II是抗Taq单克隆抗体和Taq DNA Polymerase的混合制品,适用于Hot Start PCR。高温加热前,抗Taq单克隆抗体与Taq DNA聚合酶结合,抑制聚合酶的活性,从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。该产品适用于常规的qPCR/Multiplex qPCR,也能够用来检测DNA的甲基化,可以对其进行定量或半定量的甲基化分析。
Methylight分析原理:亚硫酸氢盐处理DNA模板后,甲基化的CpG序列仍然保持CpG序列形式,未甲基化的CpG序列会转变为UpG序列。然后针对CpG和UpG所在的片段设计两对引物,进行qPCR,通过比对Ct值来确定甲基化水平。或者,只设计一对针对甲基化CpG片段的引物进行半定量分析。