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CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统,改造后的II型CRISPR/Cas9系统在基因的定点修饰中展现出巨大的应用潜能。脱靶效应是目前CRISPR/Cas9技术应用的一个难题,在基因编辑应用中,可能会出现难以预测的后果。
本制品是spCas9 Nuclease的一个突变体。Cas9 Nuclease具有两个切割活性中心,从而实现在sgRNA靶序列特定位点引入DNA双链断裂(DSB)。Cas9(D10A)Nickase在Cas9 Nuclease基础上突变其中一个切割活性中心,其能在与sgRNA靶序列所在的DNA链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂。Cas9(D10A)Nickase配合一对gRNA使用,可实现Cas9 Nuclease相同的基因编辑效果,由于有效的识别序列由20 bp增加至40 bp,可明显减少意外的脱靶基因修饰,从而显著提高CRISPR/Cas9技术基因修饰的特异性。