DNase I（Deoxyribonuclease I，脱氧核糖核酸酶I）是一种可以将单链或双链DNA同等程度进行随机分解，生成具有5'-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA，其活性非常依赖于Ca²⁺水平，并能被Mg²⁺或Mn²⁺激活。Mg²⁺存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；Mn²⁺存在条件下，DNase I能在大约相同的位点剪切DNA的两条链，从而得到带有平末端或1-2个核苷酸突出的粘末端。