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转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification,TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在42℃左右等温反应条件下来扩增RNA的系统。
如图1转录介导的扩增技术原理图所示,TMA技术首先需要针对靶序列设计一对特异性引物,其中引物1的5端带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列,这一引物与靶序列结合后,在逆转录酶的作用下进行逆转录反应,合成cDNA。在M-MLV逆转录酶的RNase H活性作用下靶标RNA链降解,形成单链cDNA。随后,引物2与cDNA结合,在M-MLV 逆转录酶的DNA聚合酶活性作用下产生靶标核酸(RNA)的一个双链DNA拷贝,该双链带有T7启动子。在T7 RNA聚合酶的作用下,一条DNA双链上产生多个(100~1000个)RNA拷贝。最后,这些转录本又可以作为TMA的起始模板,重复上述步骤。
反应结束后,可用杂交保护实验(hybridization protection assay,HPA)对RNA产物进行检测。也可通过SAT技术(Simultaneous Amplification and Testing)检测(专利号:200810111479.0),该设计基于TMA恒温扩增技术发展起来的一项最新核酸检测技术,带有荧光标记的分子信标和这些RNA拷贝特异结合,产生荧光。该荧光信号可由荧光检测仪器实时捕获,直观反映扩增循环情况,整个扩增过程都在同一温度(42℃)下进行。
图1转录介导的扩增技术原理图