摘要

以NK-92细胞为载体(NK-92是具有广谱杀瘤效应的永生化NK细胞系，辐照后输注体内能够抑制肿瘤生长)，对其进行了多种基因修饰，使其能够优势扩增外周血或脐血单个核细胞中的NK，上调NK细胞表面激活型受体的表达，大幅增强NK细胞的杀伤功能，并且能够赋予NK细胞记忆样特性，实现NK细胞的长期扩增与存活。工程细胞制备体系无动物源性成分，大多数情况下可获得>95%的NK细胞纯度。

产品介绍

自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）是机体重要的免疫细胞，属于天然免疫系统中一种具有细胞毒性的淋巴细胞。NK细胞与获得性免疫系统中的细胞毒性T细胞扮演着相近的角色。NK细胞对病毒感染的细胞或肿瘤形成有着极快的响应速率。其无需预先接触抗原即可杀伤靶细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某起情况下，参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。

一、NK细胞培养试剂盒扩增原理及技术简介

无需繁琐、昂贵的分选步骤，经两周扩增即可获得高数量、高纯度、高活性的NK细胞。

经14天培养，UNK921系列试剂盒均能实现高数量、高纯度、高活性的 NK细胞产出。

二、产品优势

此外，UNIK92I NK细胞培养试剂盒特有的优势;

三、产品规格

四、应用实例

1、建议培养过程（4.8-6.4L培养体系）

2、NK培养推荐接种量（4.8-6.4L培养体系）

3、NK细胞培养形态

脐带血

外周血

4、NK细胞收获数据

D14收集NK细胞并进行流式检测，其NK CD3^-CD56⁺比例分别均在90%以上，巅峰纯度可达99%。

五、NK细胞增殖及纯度数据统计

收集不同样本数据，细胞增殖曲线如下（左图），第十四天收获数量在1.5*10¹⁰-2.0*10¹⁰之间；NK 细胞（CD3^-CD56⁺）比例（右图）第7天达到70%以上，第十天是80%以上，第十四天可达到95%以上。

六、NK细胞杀伤能力检测

外周血或脐血来源的单个核细胞经中科赛洱(ZKcell)的通用型细胞冻存液保存，复苏后的单个核细胞经UNIK921试剂盒培养14天，再用通用型细胞冻存液对培养后的NK细胞冻存。储存一个月后对成品NK细胞进行复苏，利用实时活细胞分析系统连续监测冻存-复苏的NK细胞对K562、SKOV3、A549的杀伤。结果表明，UNIK921试剂盒能够改善NK代谢途径、使其不易发生耗竭，能够持续对肿瘤细胞进行有效杀伤，效果显著优于某进口因子体系培养的NK细胞。

七、工程细胞残留检测（人源组织/细胞STR检测）

检测方法

1、用多重PCR复合扩增系统(CELL STR ID ®)对20个STR位点和1个性别位点进行扩增；

2、PCR扩增产物用ABI 3130xl DNA Analyzer(Applied Biosystems®)进行分析；

3、检测结果用GeneMapper ID-X v1.5 (Applied Biosystems®)软件进行分析。

检测依据

参考国际细胞鉴定委员会（ICLAC）发布的细胞鉴定标准（ASN-0002-2011）：人源细胞鉴定采用STR检测方法。该方法建议，用于进行人源细胞STR鉴定时，最少包含8个STR基因座位点和一个性别基因位点。

结果分析说明

1、实验阴性对照和阳性对照结果均正常；

2、经比对，样本的 STR 分型结果呈正常二倍体细胞图谱：各基因座未见多等位基因或等位基因峰高失衡现象。同时“UNIK921 工程细胞”样本的标红等位基因未在“NK 细胞”的等位基因中发现。故样本“NK 细胞”未检出“UNIK921 工程细胞”样本的残余 DNA 成分。

STR分型结果

八、联系方式