一、应用实例

1. 建议培养过程（3.2L培养体系）

1. NK培养推荐接种量（3.2L培养体系）

3. NK细胞培养形态

脐带血NK

外周血NK

4. NK细胞收获数据

D14收集NK细胞并进行流式检测，其NK CD3^-CD56⁺比例分别为97.5%、97.9%、94.7%，均在90%以上。

二、NK细胞增殖及纯度数据统计

随机收集10份不同样本数据，细胞增殖曲线如下（左图），第十四天收获数量在1.1*10¹⁰-1.7*10¹⁰之间；NK 细胞（CD3^-CD56⁺）比例（右图）第7天达到70%以上，第十天是80%以上，第十四天可达到90%以上。

经比对，样本的 STR 分型结果呈正常二倍体细胞图谱：各基因座未见多等位基因或等位基因峰高失衡现象。同时“BTCKII 工程细胞”样本的标红等位基因未在“NK 细胞”的等位基因中发现。故样本“NK 细胞”未检出“BTCKII 工程细胞”样本的残余 DNA 成分。

三、NK细胞杀伤能力检测

外周血或脐血来源的单个核细胞经中科赛洱(ZKcell)的通用型细胞冻存液保存，复苏后的单个核细胞经BTCKII试剂盒培养14天，再用通用型细胞冻存液对培养后的NK细胞冻存。储存一个月后对成品NK细胞进行复苏，利用实时活细胞分析系统连续监测冻存-复苏的NK细胞对K562、SKOV3、A549的杀伤。结果表明，BTCKII试剂盒能够改善NK代谢途径、使其不易发生耗竭，能够持续对肿瘤细胞进行有效杀伤，效果显著优于某进口因子体系培养的NK细胞。

四、工程细胞残留检测（人源组织/细胞STR检测）

检测方法

1. 用多重PCR复合扩增系统(CELL STR ID ®)对20个STR位点和1个性别位点进行扩增；

2. PCR扩增产物用ABI 3130xl DNA Analyzer(Applied Biosystems®)进行分析；

3. 检测结果用GeneMapper ID-X v1.5 (Applied Biosystems®)软件进行分析。

检测依据

参考国际细胞鉴定委员会（ICLAC）发布的细胞鉴定标准（ASN-0002-2011）：人源细胞鉴定采用STR检测方法。该方法建议，用于进行人源细胞STR鉴定时，最少包含8个STR基因座位点和一个性别基因位点。

结果分析说明

1. 实验阴性对照和阳性对照结果均正常；

2.经比对，样本的 STR 分型结果呈正常二倍体细胞图谱：各基因座未见多等位基因或等位基因峰高失衡现象。同时“BTCKII 工程细胞”样本的标红等位基因未在“NK 细胞”的等位基因中发现。故样本“NK 细胞”未检出“BTCKII 工程细胞”样本的残余 DNA 成分。

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