多肽 (10-50AA)、重组蛋白、纳米抗体 (15kDa)、单克隆抗体 (150kDa)、多克隆抗体等蛋白分子的一级结构是发挥其生物学功能的核心，因此，对蛋白质完整序列准确快速的分析有助于未知蛋白质的功能研究。相比传统的数据库搜索法和 Edman 降解，基于质谱的从头测序可以不借助任何蛋白质或者 DNA 数据库信息，直接对蛋白质的序列进行分析。

百蓁生物拥有BSI 授权的质谱抗体测序技术、自主知识产权的 PEAKS 系列分析软件和经验丰富的专业技术服务团队。目前，我们的标准程序结合了自上而下和自下而上的质谱技术，确保了每一个氨基酸的正确性 和全抗体的序列精度，包括 N 末端及 C 末端的修饰和 N- 连接的聚糖，可弥补传统蛋白质鉴定方法在未知蛋白质序列和突变分析上的不足。

技术流程

服务优势

1.高可信度图谱支撑：每个位点的氨基酸有超过十种不同的肽段支持，每个氨基酸在质谱里有强的离子片段峰证据。

2.完整抗体质量核对：进行重链和轻链的完整质量测定，以确认组装的抗体序列，包括N末端焦谷氨酸环化修饰，重链C末端赖氨酸丢失和N-连接的寡糖。

3.亮氨酸（L）和异亮氨酸（I）区分：1）EThcD中的w-ion检测、2）酶裂解选择性、3）同源性统计数据，以明确区分Leu / Ile残基。

图 | 利用 EThcD 谱中的诊断离子区别亮氨酸（L）和异亮氨酸（I） 

图 | 利用胰凝乳蛋白酶或胃蛋白酶对亮氨酸（L）的优选选择性

 图 | I/L 区分的三重验证

4.无需理论参比序列，并且可以直接对含有2个主要成分的多克隆抗体进行直接的从头测序分析。

应用领域

1.多肽药物、重组蛋白、单抗、双抗、多抗（n=2）、纳米抗体、Fab/Fc、交联抗体等未知蛋白的从头测序；

2.抗体药物研发以及生产过程的质控。

样品要求及交付标准

案例分享

案例分析：左图是抗体样品从头测序实例，在没有参考序列情况下，经过 PEAKS AB 软件，使用 de novo 算法自动化组装后的序列，每一个氨基酸都有很多 de novo 肽段支持（红色部分），右侧是样品参考序列。可以发现左边组装序列重链 68-70 位氨基酸分别是TLS，而参考序列此处的氨基酸是 SIT，TLS 与 SIT 的分子量相同，但是 SIT 氨基酸是没有 de novo 肽段支持的。由此可见 de novo 算法是不仅仅区分分子量的，还可以根据多肽二级质谱图的碎片信息精确区分到每一个氨基酸。

抗体标准品重链序列