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收藏本试剂盒基于 StarScript III 反转录酶开发的,采用茎环结构的逆转录引物与 miRNA 分子 3’ 端结合,在 StarScript III 反转录酶的作用下,获得人为加长的 miRNA 第一链 cDNA。
推荐使用通用的茎环序列为 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC-3',也可根据实验需求选择其它茎环序列。通常情况下,逆转录引物只需在茎环序列上添加目的 miRNA 3’ 端的 6 个反向互补碱基即可。 此方法特异性高,只对成熟的 miRNA 进行反转录,不受其前体干扰,序列高度同源的 miRNA 也可以精确区分。使用本产品获得的逆转录产物可直接用于后续的染料法或探针法荧光定量检测。染料法推荐使用本公司的 2×RealStar Fast SYBR qPCR Mix(Cat#A301),探针法推荐使用本公司的 2×RealStar Fast Probe Mix(Cat#A351),以获得更优的实验结果。