产品简介

Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶I，改进了等温扩增性能及反转录活性的大片段同源物。Bst DNA聚合酶具有对DNA或RNA模板的5’→3’聚合酶活性和强链置换活性，但没有5’→3’和3’→5’核酸外切酶活性。Bst DNA聚合酶具有在高浓度DNA扩增抑制剂中扩增的强大性能，而且反转录酶的活性也显著增强。

产品规格

保存条件

干冰运输，请注意避免反复冻融。-20℃储存，长期储存放置-80℃，有效期1年。

适用范围

等温扩增（LAMP或RT-LAMP）；

链置换DNA扩增反应；

耐高温反转录（高达72 ℃）；

扩增能力强，可在扩增抑制剂或不纯样本中扩增。

酶活定义

1单位（U）指65 ℃条件下反应30 min，能使25 nmol的dNTPs掺入酸不溶物所需的酶量。

失活条件

85 °C反应5 min失活。

质量控制

蛋白纯度

使用分子排阻高效液相检测重组酶纯度。

核酸外切酶残留

20 μL反应体系，20 U本品和0.6 μg λ-Hind III在37 ℃下孵育3 h，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留

20 μL反应体系，20 U本品和0.6 μg λDNA，37 ℃温育3 h，DNA 的电泳谱带无变化。

核糖核酸酶残留

20 μL反应体系，20 U本品和2 μg RNA在37 ℃下孵育1 h，

RNA的电泳谱带不发生变化。

大肠杆菌DNA残留

20 μL体系中，以本品为模板，扩增E.coli 16 s rDNA基因，30个循环内，无扩增。

实验流程

1.按照以下组分配置 LAMP 等温扩增反应液，建议反应体系：

*引物终浓度推荐：1.6 μM FIP/BIP，0.4 μM LF/LB，0.2 μMF3/B3。

2.混匀，离心数秒，置于定量仪65 ℃反应，每分钟收集一次荧光信号，设置35-45 cycles，85 ℃, 5 min灭活。

3.如果实验需要，可以在2%琼脂糖凝胶进行电泳分析条带。

应用实例

酶活稳定性实验

图1. Bst DNA Polymerase加速稳定性 (4℃) 。酶加量: 10U和5U反应。

结论：该酶在4℃放置21d，酶活不受影响。

图2. Bst DNA Polymerase冻融稳定性。酶加量: 10U和5U反应。

结论：该酶反复冻融60次，酶活不受影响。

图3. Bst DNA Polymerase加速稳定性（37℃）。酶加量: 10U和5U反应。

结论：该酶在37℃放9d，酶活不受影响。超过9d酶活开始下降。