产品简介

LwaCas13a（又名 C2c2）属于Ⅱ类Ⅵ型CRISPR系统效应蛋白，具有crRNA介导的RNA内切酶活性。在靶标单链RNA存在PFS序列的情况下，可特异性地切割靶标RNA。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现CRISPR/Cas13a对RNA模板的检测和信号放大。可通过荧光仪或试纸观察结果。

此外，Cas13a 还具有依赖于靶标单链 RNA 的反式切割活性（即旁路切割活性）。当 LwaCas13a 蛋白与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列单链RNA的反式剪切活性，将体系中的任意序列单链RNA切碎，可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒。

产品特点

采用一步法纯化制备，最大程度保留酶活性，经过测试酶活性显著高于同类产品。

产品规格

保存条件

≤ 0 ℃运输；-20 ℃储存，长期储存于-80 ℃，避免反复冻融。

在-20 ℃条件下有效期12个月。

质量控制

蛋白纯度

高效液相色谱（SEC-HPLC）和SDS-PAGE检测，纯度≥95%。

核酸外切酶残留

20 μL反应体系，10 pmol本品和0.6 μg λ-Hind III在37 ℃下孵育3小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留

20 μL反应体系，10 pmol本品和0.6 μg λDNA在37 ℃温育3 h，DNA的电泳谱带无变化。

RNase残留

20 μL反应体系，10 pmol本品和2 μg RNA在37 ℃下孵育1 h，RNA的电泳谱带不发生变化。

建议使用方法

1. LwaCas13a的crRNA序列设计参考如下：

5’-GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN-3’

其中，5'-Direct Repeat region (长度36nt，直接重复区，下划线表示) + Spacer region (长度25-35nt，靶标结合区，蓝色字体表示）-33。

*Cas13a切割靶标ssRNA需要特定5'-A/T/U-3’的PFS.（protospacer flanking sequence）。

2. 反式剪切实验，建议反应体系：

37 ℃每 30-60 s 收集一次荧光，80-99 cycles。

注意事项

1. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

2. Cas13a 酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，并在使用后立即将酶置于-20 ℃保存。

3. 为了保证反应的正常进行，需使用高质量的 RNA 模板。

应用实例

LwaCas13a Nuclease 切割 ssRNA 灵敏度检测