产品简介

逆转录酶（M-MLV Reverse Transcriptase）是通过基因修饰和重组技术获得的第四代M-MLV逆转录酶。该酶相对于以往的M-MLV逆转录酶，对干扰cDNA合成的抑制剂耐受性提高了，可以对不同来源的样品进行稳定的特异性cDNA合成。同时反应更快，孵育时间从>50 min缩减到10 min，连续合成（最终产物12.3 kb）的能力比以前的版本有所提高。

产品组成

适用范围

-80℃储存，避免反复冻融。

酶用途

该酶可用于荧光型RT-RPA或RPA，依据引物筛选优化程度和检测手段，其检测下限为10-100拷贝/测试，反应时间不超过15分钟。

稳定性

-80℃放置3个月，酶应用活性无显著降低（数据更新中）；

冻融5次，酶应用活性无显著降低；

4℃下放置21天，酶应用活性无显著降低（数据更新中）；

冻干后，酶应用活性无显著降低；

质量控制

蛋白纯度

使用分子排阻高效液相检测逆转录酶4.0纯度。

核酸内切酶活性

50 μL反应体系中包含10 μL逆转录酶4.0与500 ng环状质粒DNA，37℃下温育4小时后，使用琼脂糖凝胶电泳检测核酸内切酶活性。

核酸外切酶活性

50 μL反应体系中包含10 μL逆转录酶4.0与500 ng双链DNA片段，37℃温育4小时，使用琼脂糖凝胶电泳检测核酸外切酶活性。

RNA水解酶活性

50 μL反应体系中包含10 μL逆转录酶4.0与500 ng单链RNA，37℃温育4小时，使用琼脂糖凝胶电泳检测RNA水解酶活性。

宿主DNA残留

以大肠杆菌16S rDNA为靶标，采用荧光定量PCR法检测重组酶中宿主DNA残留量。

应用实例

酶活性实验

图1. 不同类型模板扩增灵敏度。RT-RPA反应体系包含重组酶、重组酶辅助蛋白、单链DNA结合蛋白、DNA聚合酶、逆转录酶4.0、外切酶III、PRA缓冲液、PEG和海藻糖，于qPCR仪中，42℃反应25分钟。(A)一种RNA病毒模板；(B)一种DNA质粒模板。

酶稳定性实验

图2. 逆转录酶稳定性。逆转录酶于储存液中冻干(A)、4℃放置21天(B)，采用RT-RPA反应体系测定酶稳定性, 模板: RNA病毒，模板量: 10⁴和10³拷贝/反应。