慢病毒载体(Lentivirus vector)是以慢病毒基因组为基础，由所需的目的基因取代部分基因构建而成。目前使用的慢病毒载体多采用HIV-1基因组改造而来。与一般的逆转录病毒载体相比，慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力而具有更广的宿主范围。慢病毒载体还可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久表达。在感染能力方面可以有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，又很少引发机体免疫反应。

派真生物提供的慢病毒为“自杀”性病毒，即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。派真生物提供丰富的慢病毒产品，用于操作编码基因和非编码基因，如lncRNA、microRNA、circRNA等。

服务内容

备注：

1、细胞级慢病毒包装推荐用于细胞实验；动物级慢病毒包装推荐用于动物实验。

2、对包装过程有不利影响的基因（例如毒性基因，破坏包装细胞完整性的基因，破坏慢病毒RNA基因组完整性的序列，易于重排或者产生二级结构的序列等）、核蛋白、跨膜蛋白、受体基因和LTR之间（不含LTR）片段≥6.5kb的慢病毒定制包装不保证产量。

3、下单免费赠送10%荧光对照病毒。

服务优势

1、快速：1E+8TU以内最快可在7个工作日交付；

2、可靠：交付滴度≥1E+8TU/mL，不担心滴度虚高，滴度最高可达1E+9TU/mL；

3、周到：及时响应式专业技术支持服务，定制病毒包装服务附赠10%的荧光对照病毒；

4、免邮：货物干冰低温运费均由派真生物承担；

5、全面：提供从载体设计、病毒包装到分析检测的一站式服务。

慢病毒包装流程

慢病毒质控

1、多重酶切鉴定生产病毒所用质粒(常规质控)

2、梯度稀释感染细胞，计数荧光细胞以测定病毒滴度(适用于表达荧光蛋白的定制慢病毒)；

3、感染细胞，定量qPCR测定慢病毒滴度(适用于不表达荧光蛋白的定制慢病毒)

实验设计参考

慢病毒感染MOI计算



病毒液体积=细胞数 × MOI/病毒滴度

举例:滴度1×10^8 TU/mL的慢病毒感染HEK293细胞所用培养基体积和病毒量；假如24孔板细胞接种量是5×10^4； 6孔板细胞接种量为2×10^5个T25瓶细胞接种量是5×10^5个。

慢病毒感染MOI预实验步骤:

第一天：铺板，设置MOI梯度，可以按照MOI为2.5，5，10，20，40，80或者自行根据实际情况设置梯度。同时设置一个空白对照组，用来判定细胞状态。注：建议设置一组复孔，如下图所示：

细胞接种：一般24孔板每孔接种 3~5×10^4个细胞：如果细胞特别大可以适当减少，特别小可以适当增加；原则上建议第二天融合度约30~40%最佳。

感染：细胞接种后第二天加入慢病毒：按照设置的MOI算好每孔加的病毒量。慢病毒感染细胞可以加polybrene来增加感染效率，终浓度为5ug/ml，轻轻摇匀后，放回培养箱继续培养；

换液：感染后8~20小时后，提前37°C预热培养基，弃去含有病毒的培养基，加入新鲜培养基，放回培养箱继续培养。

检测并确定合适的MOI值：在荧光显微镜下观察荧光表达情况或者通过qPCR检测目的基因的表达，来判断选择合适的MOI进行慢病毒感染实验。

慢病毒体外感染操作步骤



以24孔板为例，进行目的细胞感染预实验，按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据公式算出所需病毒量，如有必要可用无血清培养基稀释病毒原液。

贴壁感染

第一天，准备细胞：24孔板接种若干孔细胞，每孔接种约3~5×10^4个细胞，每孔培养基体积500μL; 进行病毒感染时，细胞融合度大约30~50%。

第二天，准备病毒并感染细胞：－80°C冰箱取出病毒先在冰上融化或者4°C融化，根据算好加入的病毒量稀释到培养基中，尽可能保证含有慢病毒的培养基为最小体积，以获得最佳感染效果；

更换培养基：一般感染8~20h后将含有病毒的培养液更换为新鲜培养基，感染后注意观察细胞状态，如果慢病毒感染对细胞有明显毒性而影响到细胞状态，则建议在加入病毒4~6h后，更换新鲜培养基。

感染效率检测：一般感染48~72h后，在倒置荧光显微镜下观究光，估计慢病毒感染目的细胞的效率：如果慢病毒没有带荧光标记则可通过qPCR检测目的基因的表达来评估感染效率。

注意：慢病毒表达时间较慢，荧光表达所需时间较长，建议感染后72h后再观察荧光表达以判断感染效率；感染期间请根据细胞生长状态，对细胞进行及时换液以保证良好的生长状态。

悬浮感染

接种适量胰酶消化后(或悬浮状态细胞，以在第二天密度约40%为宜。按计算所需要病毒体积，加入相应体积的培养基中，混匀。

更换培养基：加入病毒感染16小时后换液（若病毒对细胞状态影响不大，可48小时后再换液）。

感染效率检测：一般感染48~96小时后观察荧光，或者根据病毒裁体设计加入相应药物筛选。

常见细胞感染MOI