非人灵长类动物（NHP）研究通常涉及大型动物，往往需要较高剂量的腺相关病毒（AAV）载体。然而，低质量的AAV载体可能会引发动物的免疫反应或增加毒性风险，从而对实验结果和动物健康产生不利影响。为了有效降低这些风险，并显著提升NHP研究的质量与可重复性，派真生物精心研发并提供高质量的NHP级AAV载体。该载体能够精准测定病毒滴度、基因组完整性、空衣壳比例，并严格控制杂质污染。借助派真生物的高质量NHP级AAV载体，研究人员可显著降低安全风险，提升治疗效果，并在NHP研究中获得更为可靠且可重复的实验数据。

关键优势

• 精确的滴度
• 良好的基因组完整性
• 内毒素和污染控制
• 提高治疗效果
• 降低安全风险
• 可重复的结果

服务明细

AAV的产量受到多种因素的影响，包括血清型、目标基因以及其他相关变量。为了满足客户的需求，我们针对一些常见且能够实现高产量的AAV血清型（如AAV1、AAV3b、AAV5、AAV7、AAV8、AAV9和AAV Rh10等）提供有保障的包装服务。对于那些产量较低或尚未明确的血清型，我们则依据实际产量进行生产。为了精准确定实现目标所需的产量，我们建议客户先进行小规模测试。如果您不确定所选择的血清型是否符合我们套餐的保障条件，欢迎随时联系我们的技术支持团队，以获取更详细的信息。

质量标准

NHP 级 AAV 在放行前经过严格的 QC 测试，以确保 AAV 产品的质量并最大限度地减少动物研究中的不利影响。

ddPCR

相较于qPCR，ddPCR能更准确地定量AAV滴度，因此，我们用ddPCR检测AAV 产物的滴度，如果首次测量AAV的滴度大于1E+13 vg/mL，则将其稀释至滴度为 1 E+13 vg/mL后再次测量。对于保证产量的AAV血清型，产品的浓度和总量将满足保证产量包；对于非保证产量的AAV血清型，产品的浓度和总量将基于生产规模。

研究案例

我们采用多种不同的检测方法从各个方面评估了AAV的质量，包括其基因组完整性、衣壳大小和污染物的存在等，以确保AAV可以用于NHP的研究。

微滴式数字PCR(ddPCR)是一种高灵敏度的定量样品中AAV含量的方法。它可以准确和精确地测量每毫升的AAV基因组拷贝数。

定量PCR(qPCR)是一种检测和定量样品中支原体污染的方法。支原体是细胞培养物中的常见污染物，会影响AAV质量，因此确认其不存在很重要。

毛细管电泳(CE)是一种用于分析AAV基因组完整性的技术。CE 可以检测截短或重排的 AAV 基因组片段的存在，这可能会影响 AAV 的效力和安全性。

十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和银染是分析AAV衣壳蛋白大小和纯度的方法。这些方法可以检测杂质的存在，并确保衣壳大小与AAV血清型的预期大小一致。

透射电子显微镜(TEM)和分析型超速离心(AUC)是确定AAV样品中空壳比例的方法。空衣壳是不可取的，因为它们不含治疗的有效成分，并且会降低 AAV 载体的功效，因此监测空壳率对于确保AAV产品的效力和质量非常重要。

在收到客户的AAV顺式质粒模板后，除了在克隆筛选期间验证GOI大小外，我们还对ITR完整性进行了双重检查，然后再放大质粒生产规模。质粒制备完成后，进行另一轮ITR和GOI测序，确保序列的保真度。您可以放心，我们用于 NHP 级 AAV 的质粒具有最高的质量和完整性。