腺相关病毒（AAV）作为基因治疗的明星载体，与慢病毒载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体等其他常用病毒载体相比，具有高安全性、低免疫原性、宿主细胞范围广（感染分裂和非分裂细胞）、易生产、高穿透性、长时表达、定点整合等优点，已被广泛用于基因功能研究。

经过重组和改造的AAV载体拥有不同的血清型，根据血清型不同而具有不同的宿主范围和病毒特征，可以有效作用于特定细胞类型，包括分裂和非分裂细胞类型，在基础科学研究或临床水平的动物和细胞实验中显示出广阔的前景。

派真生物可提供多种血清型AAV定制包装，以满足您各种实验需求。我们通过创新的AAV包装工艺，确保为您提供高纯度（95%以上）、高滴度（1E+13GC/mL以上）的AAV，内毒素符合最高标准要求（<10EU/mL）。

服务内容

备注：

• 常规产量AAV：AAV1等AAV且ITR序列为野生型；
• 超低产量AAV：AAV2、AAV4、AAV6等AAV或双链ITR载体；
• 未知产量AAV（符合以下其中一种条件即可）：
• ① 特殊血清型：超低产血清型质粒或者新血清型质粒生产；
• ② 客户提供血清型质粒/helper质粒；
• ③ GOI质粒超载(ssAAV的ITR之间长度＞4.5kb，scAAV的ITR之间长度＞2.5kb)；
• ④ 客户提供的GOI质粒的ITR元件非野生型或者客户不提供SMAI/XMAI酶切信息以及质粒酶切后SMAI/XMAI与预测图不符合的；
• ⑤ 非常规派真生产体系：比如客户提供包装方案；定制化的缓冲液配方；非派真常用的细胞系等。

服务优势

快速：AAV总量5E+13GC以内可在6-9个工作日交付；

可靠：交付滴度≥1E+13GC/mL，经进口标准品校正，不担心滴度虚高；

高质：AAV纯度95%以上、内毒素<10EU/mL，适用于病毒纯度较敏感的细胞与动物实验。此外可选测HPLC、电镜空壳率、支原体、rcAAV、TCID50等几十项指标；

血清型丰富：提供 18 种以上不同的血清型选择；

周到：及时响应式AAV专业技术支持服务，定制AAV病毒附赠10%的荧光对照病毒；

免邮：货物干冰低温运费均由派真生物承担；

全面：提供从载体设计、病毒包装到分析检测的一站式服务。

AAV包装流程

AAV质控

1. 常规质控

（1）多重酶切鉴定生产病毒所用质粒（常规质控）

（2）AAV滴度检测，SYBR Green QPCR标准曲线精确定量（常规质控）

原始扩增曲线&标准曲线

备注：派真所生产AAV的最终滴度经过与来自ATCC的AAV标准品ATCC VR-1816™（全球16个实验室共同测定认可的标准滴度），确保符合学术界主流标准，避免滴度虚高。

（3）AAV纯度检测，SDS-PAGE电泳与考马斯亮蓝染色确定纯度(用于部分AAV的常规质控)

派真AAV生产的常规检测结果 （第2、4、6~9泳道为AAV样 品，其余为蛋白Marker）

（4）内毒素检测（用于部分AAV的常规质控）

2. 其他质控

（1）HPLC纯度检测（用于部分AAV的可选质控，需额外2个工作日）

派真AAV2-EGFP样品的HPLC测试，第一个峰为AAV。按峰面积比例计算纯度为99%。

（2）电镜检测（用于部分AAV的可选质控，需额外2个工作日）

派真AAV样品电镜照片

AAV血清型选择及预实验设计参考

AAV有许多不同的血清型，其主要区别是衣壳蛋白不同，因此对不同的组织器官的转染效率存在差异。对于文献报道较少的靶组织，建议研究者通过预实验测试确定最理想的血清型，这也将是实验创新点之一。派真生物可为您提供多种AAV血清型，满足您的实验需求。

（1）体内实验

此外，由于研究领域不同、选择的实验动物不同，AAV注射部位如何选择，应该注射多少病毒，注射后多久检测等实验细节一般没有简单广泛的规则。建议研究者参考权威期刊发表的文献，或者自行试验摸索。

预实验设计参考：

血清型选择：如果您还不清楚哪种血清型最适合您的实验材料，可以尝试3种以上的荧光AAV血清型来做预感染实验。

梯度稀释感染：由于不同基因的长度和表达水平差异，我们强烈建议您在正式实验前，进行3-4次AAV梯度剂量注射来检测目的基因表达水平。

实验对照：设置一个具有相同血清型和启动子的GFP阳性对照组

检测时间：通常情况下，AAV注射3-4周后可以检测到表达产物，我们也推荐在4周或更长时间后进行检测。

（2）体外实验

细胞选择：对于体外培养的细胞，AAV-DJ和AAV6是最普遍的选择。在常规细胞培养中，AAV-DJ可以感染80％以上的细胞，而AAV6对血液来源细胞具有最强的感染效力；

梯度浓度感染：我们强烈建议您在正式实验前进行梯度浓度感染预实验（至少3-4个梯度，例如MOI=1×10^3,MOI=1×10^4,MOI=1×10^5）；此外，无细胞毒性是这类实验的基本需求；

检测时间：通常在感染后2-7天进行检测。