工作原理：
磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）检测原理：
磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）检测用于测量在 Ser177/181 位点磷酸化的胰岛素受体 β。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板，不需要凝胶、电泳或转膜。磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）检测使用两种标记抗体，一种带有供体荧光团，另一种带有受体。第一种抗体因其对蛋白质上磷酸化基序的特异性结合而被选择，第二种抗体因其能够识别不依赖于其磷酸化状态的蛋白质的能力而被选择。蛋白质磷酸化使得涉及两种标记抗体的免疫复合物形成，这使供体荧光团与受体紧密接近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。其强度与样品中存在的磷酸化蛋白的浓度直接成正比，并在无需洗涤的检测形式下提供了一种评估蛋白质磷酸化状态的方法。

磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）双板检测方案：
双板方案涉及在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中，之后加入磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和融合度。

磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）单板检测方案：
使用 HTRF 试剂检测磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）可以在一个用于培养、刺激和裂解的单板上进行。无需洗涤步骤。这个为高通量筛选设计的方案能够实现微型化，同时保持强大的 HTRF 质量。

检测验证：
在 HepG2 细胞上的磷酸化胰岛素受体 β（Tyr1150/1151）示例：
HepG2 细胞以每孔 100,000 个细胞的密度接种在 96 孔板上。在 37°C、5% 二氧化碳的条件下孵育过夜后，在细胞下加入一系列稀释的胰岛素，在 37°C、5% 二氧化碳的条件下处理 5 分钟。从细胞中移除刺激培养基，并向细胞中加入 50µL 的裂解缓冲液。通过轻轻振荡 30 分钟进行裂解步骤。将 16µL 的样品转移到 384 孔小体积板中，然后加入 4µL 的磷酸化胰岛素受体 β HTRF 检测试剂。信号在过夜后记录。

在 HepaRG 细胞上的磷酸化胰岛素受体 β（Tyr1150/1151）示例：
HepaRG 细胞以每孔 200,000 个细胞的密度接种在 96 孔板上。在 37°C、5% 二氧化碳的条件下孵育 5 天后，在细胞下加入一系列稀释的胰岛素，并在存在 30µM 过钒酸盐的情况下，在 37°C、5% 二氧化碳的条件下处理 5 分钟。从细胞中移除刺激培养基，并向细胞中加入 50µL 的裂解缓冲液。通过轻轻振荡 30 分钟进行裂解步骤。将 16µL 的样品转移到 384 孔小体积板中，然后加入 4µL 的磷酸化胰岛素受体 β HTRF 检测试剂。同时，将 16µL 转移到其他孔中，并加入 4µL 的总胰岛素受体 β HTRF 检测试剂。信号在过夜后记录。

磷酸化胰岛素受体 β（Tyr1150/1151）与蛋白质印迹法的比较：
人类 Hek 293 细胞培养至 80% 融合度。在胰岛素和过钒酸盐共同处理后，细胞被裂解，并通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释，将每种稀释液的 16µL 转移到 384 孔低体积白色微孔板中，最后加入磷酸化胰岛素受体 β 细胞检测试剂盒试剂。并行比较显示，HTRF 磷酸化检测至少比蛋白质印迹法灵敏 8 倍。