检测原理：
细胞上清液、样本或标准品直接分配到检测板中，通过 HTRF® 试剂进行检测（384 孔低体积白色板或 Revvity 低体积 96 孔板，20 微升）。用 HTRF 供体和受体标记的抗体预先混合，并在一个分配步骤中加入，以进一步简化检测程序。通过简单地按比例调整每次添加的体积，该检测可以扩展到 1536 孔格式。

检测数据分析：
四参数逻辑（4PL）曲线通常被推荐用于拟合 ELISA 标准曲线。与线性分析相比，这种回归能够在更宽的浓度范围内准确测量未知样本，使其非常适合用于分析细胞因子释放等生物系统。

为了充分了解如何处理 HTRF 数据处理以及 4PL 1/y² 拟合，Revvity 还与 Myassays.com 合作，帮助你进行数据分析。你将能够访问一个免费的在线软件来进行你的 TNF alpha 分析。

检测验证：
用 JTE607 抑制 THP1 细胞中 TNF alpha 的分泌：
以每孔 100,000 个细胞的密度接种 THP1 细胞，用不断增加浓度的 JTE607 孵育 18 小时，然后用 2 µg/mL 的 LPS 刺激 3 小时。然后将 16 µL 的上清液转移到白色检测板（384 孔低体积）中，用人 TNFα 检测进行分析。

LPS 刺激的外周血单个核细胞（PBMC）中 TNF alpha 的分泌：
以每孔 50,000、100,000、200,000 和 400,000 个细胞的密度接种 PBMC，用不断增加浓度的 LPS（0、0.02、0.2、2 µg/mL）刺激 3 小时。然后将 16 µL 的上清液转移到白色检测板（384 孔低体积）中，用人 TNFα 检测进行分析。