RNase R是一种来源于大肠杆菌RNR超家族的3’-5’核糖核酸外切酶，可从3’-5’方向将RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R可消化几乎所有的线性RNA分子，但不易消化环形RNA、套索结构或3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子。

RNase R是circRNA的鉴定和富集实验必备工具酶，可消化线性RNA以使环形RNA（circRNAs）或套索结构RNA（lariat RNA）得到富集。

图1.RNase R消化RNA示意图

应用场景

1. circRNA的鉴定

根据RNase R(+)和RNase R(-)组中是否检测到条带来证明检测的分子是否是circRNA。

图2.RNase R消化后RT-PCR检测Lariat/Circular RNA

在图2中，检测mRNA在RNase R(-)中有条带，在RNase R(+)中无条带；检测Lariat/Circular RNA，在RNase R(-)和RNase R(+)样品中都有条带，表明mRNA被消化，而Lariat/Circular RNA耐受消化（Suzuki H et al., 2006）。

2. circRNA的富集

高通量测序时常需要对circRNA进行富集，为探究RNase R消化后circRNA的富集程度和相关基因的变化，可以同时做RNase R(+)和RNase R(-)组样品的测序。
 

图3.RNase R(+)和RNase R(-) RNA测序示意图（Jeck WR et al., 2014）

有研究报道，测序显示RNase R(+)组中Junction Reads相对于RNase R(-)样本有5-10倍的富集，可鉴定出几千到上万个circRNAs（图3）。

3.circRNA的纯化

消除线性RNA残余的干扰，是人工合成高纯度circRNA的关键。高效的RNase R不仅是连接酶法circRNA人工合成的关键工具，在内含子自剪切的circRNA人工合成中也是必不可少的。

图4. 吉赛生物circPrecise™平台制备环状RNA产物（“纯化产物”使用GSPure® RNase R纯化）

产品优势

特异性强：特异性消化线性RNA；

高效快速：5-15min即可消化大部分线性RNA；

Buffer兼容：消化产物可直接用于下游实验；

使用方便：体系简单，37℃一步反应。

质量控制

SDS-PAGE 检测纯度>95%；Total RNA经RNase R消化后进行RT-qPCR检测，线性 RNA丰度明显降低，环形RNA丰度基本不变。

性能比较

1.RNA电泳检测

将10U RNase R加入到2.5 μg Total RNA中，于37℃孵育15 min后直接进行电泳检测，结果显示RNase R(+)组条带变淡（不可见），表明RNase R对Total RNA产生消化作用。吉赛和公司A或公司E的RNase R对Total RNA消化效果相当。

3.RT-qPCR检测

将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中，于37℃孵育30 min后进行RT-qPCR实验，结果显示RNase R+组β-actin和FGFR2的丰度都明显降低，表明RNase R可消化线性RNA。吉赛和公司E的RNase R对线性RNA消化效果相当，优于公司A的RNase R。

将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中，于37℃孵育30 min后进行RT-qPCR实验，结果显示RNase R+ 组中hsa_circFOXO3_002和hsa_circMTO1_001的丰度基本不变，表明circRNA耐受RNase R的消化。吉赛和公司E或公司A的RNase R效果相当。

注：数据计算以“RNase R+吉赛”组为对照，设定其相对丰度值为1。