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收藏物理形态: 质谱级rLys-C蛋白酶是冻干粉,含0.5mg海藻糖/瓶
分子量: 27kDa.
溶解液(HLS HAc001C):rLys-C蛋白酶复溶解缓冲液建议1mM盐酸或50mM醋酸
储存条件:冻干粉末存储在-20°C,再溶解的酶储存在-20°C。有效期见产品标签
保质期:24月在-20°C
pH 值范围: 在 8-9 时, rLys-C 具有最佳活性
适用范围:rLys-蛋白酶特异性水解变性后比较不易酶切的蛋白质K位,推荐和Trypsin混合使用。
混合酶推荐SOP:
A. 通用溶液酶解法
100ug 胰蛋白酶/20ug rLys-C 混合酶按照 25:1 蛋白和蛋白酶的量(w/w)使用, 37°C恒温过夜13-16小时.
温馨提示:尿素的浓度最好小于1M, 50mM Tris-HCl 缓冲溶液(pH 8)
B. 1+1步溶液酶解法
1. 100ug Trypsin/20ug rLys-C 混合酶按照 25:1 蛋白和蛋白酶的量(w/w)使用, 37°C.恒温酶解2-4小时.
温馨提示:尿素的浓度为6-8M, 50mM Tris-HCl 缓冲溶液(pH 8)
2. 稀释上一步的溶液6倍,37°C恒温过夜13-16小时
温馨提示:尿素的浓度最好小于1M, 50mM Tris-HCl 缓冲溶液(pH 8)
质量控制|Quality Control
纯度: 液相色谱280nm检测杂质蛋白质峰强度,rLys-C峰强度大于99.9%
专一性:E.coli大肠杆菌样品,ESI-MS/MS质谱分析K端的专一性大于99.5%
活性: 25unit/min/mg;单位定义:rLys-c白蛋酶每分钟酶切1.0 umole T-G-P Lys Nitroanilide的量,反应条件:25°C,波长405nm
Maldi TOF质谱检测: 纯化后的蛋白酶使用HCCA基质激光解析质谱分析未见杂质蛋白质峰
LC-MS/MS 质谱分析: 使用rLys-c酶解HSA(人血清白蛋白,纯度99.9%)实验,DTT还原,IAA保护,PH8.0, 37°C恒温过夜16小时,液质Q-E联用仪 分析,覆盖率87%