微谨生物会根据您的细菌/真菌特性，选择最优的编辑系统：

1. CRISPR/Cas9基因编辑系统：创新性结合CRISPR/Cas9系统和Red/ET重组系统，利用CRISPR/Cas9系统的高效定点切割优势，以及Red/ET高效重组优势，极大提高了细菌和真菌的基因编辑的效率。而且还能实现无痕编辑，大大提高后续实验可靠性。

2. 位点特异性基因重组系统：Cre-lox 系统来源于大肠杆菌P1 噬菌体，可以促使噬菌体DNA插入到细菌基因组中。Cre 重组酶可以识别长度为34 bp 具有方向性的loxP位点。同一DNA分子上同向的两个loxP 位点发生重组，可以删除两个loxP 位点之间的DNA片段；同一DNA 分子上反向的两个loxP 位点发生重组，可以使两个loxP 位点之间的DNA片段发生倒置。在细菌基因编辑中，Cre-lox 重组系统常用作删除选择标记基因、大片段基因的删除和倒置等。

3. 同源重组系统：在细菌中引入两端具有与受体基因组DNA同源片段的外源dsDNA 分子，借助于λ-Red 重组系统或RecE/T 重组系统，诱发同源片段中间的外源DNA 序列与基因组序列发生交换，可实现基于同源重组的基因编辑。

微生物基因编辑定制服务

微谨生物提供多种微生物的编辑服务，微生物类型包括多种常见细菌和真菌：

*如果您研究的细菌/真菌不在上述清单中，请联系我们制定一对一定制方案。13241131665（微信同号）

服务类型

• 无痕基因敲除：利用Red/ET重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统结合，实现高效定点切割，并消除外源质粒。
• 无痕基因点突变：利用CRISPR/Cas9系统的高效定点切割优势，实现基因组定点突变。
• 无痕基因敲入：利用Red/ET重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统结合，实现基因组定点敲入。

技术优势

• 高效定点切割：利用CRISPR/Cas9系统的高效定点切割优势，极大提高了细菌基因编辑的效率。
• 无痕编辑：可实现无痕敲除（不残留抗性或重组位点），同时消除外源质粒。
• 操作简单：通过电转的方法将CRISPR载体导入细菌体内进行基因编辑，可实现敲除、点突变和敲入等操作。
• 靶向性强：CRISPR技术具有靶向性强、脱靶率低等优势，可实现对特定基因的精准编辑。
• 适用范围广：可实现多种微生物的编辑服务，包括细菌、真菌等。

基因编辑微生物定制流程

1. 根据客户需求、细菌/真菌类型和靶基因的情况进行基因编辑方案设计

2. 构建编辑载体

3. 制备感受态以及电转

4. 抗性筛选获得阳性克隆菌株

5. 对编辑后的菌落进行PCR鉴定和靶位点测序鉴定

基于Cas9系统的微生物基因组编辑

微谨生物致力于为客户提供品质最优的产品，客户的信赖是我们的最大动力！我们承诺所提供的服务均有品质保证，欢迎咨询！13241131665（微信同号）

微谨生物基因编辑微生物案例分享

CRISPR/Cas9用于乳酸克鲁维酵母基因组编辑——构建NHEJ修复途径缺失菌株

（1）sgRNA设计，选择切割效率和特异性高的gRNA。

（2）编辑载体构建：将上述gRNA插入通用载体的sgRNA表达盒中，通用载体携带Cas9表达框与sgRNA表达盒，同时将靶基因的上游和下游同源臂连接到通用载体。

图2. ku80基因敲除验证结果

（3）编辑载体转化与筛选：将编辑载体电转化感受态细胞，菌落PCR验证转化子，对阳性转化子PCR产物测序验证。

（4）突变菌株功能鉴定：比较NHEJ修复途径缺失菌株与野生型菌株敲除同一个基因的效率，结果显示敲除ku80基因后的菌株敲除效率从35%提高到了100%。证实在乳酸克鲁维酵母中敲除ku80基因能有效阻断NHEJ途径，激发细胞的同源重组系统，从而提高基因编辑效率。

图3. ku80基因敲除后基因编辑效率比较