RNA Pull Down实验原理

佐润生物采用标准化RNA Pull Down流程，确保互作蛋白检测的高灵敏度和特异性：

1、探针设计与RNA标记​​

· 针对目标RNA序列设计互补生物素标记探针（如DNA/RNA探针）；

· 通过体外转录或化学合成法标记高纯度RNA探针，确保探针特异性与稳定性。

2、RNA-蛋白结合反应​​

· 将生物素标记的RNA探针与细胞裂解液或纯化蛋白混合，孵育形成RNA-蛋白复合物；

· 优化缓冲液条件（如RNA酶抑制剂、去垢剂浓度），维持天然互作构象。

3、磁珠富集与洗涤​​

· 利用链霉亲和素磁珠捕获RNA-探针-蛋白复合物，离心去除游离蛋白；

· 多梯度洗涤（高盐/低盐缓冲液）去除非特异性结合蛋白，保留高亲和力互作蛋白。

4、互作蛋白检测与鉴定​​

· ​​Western Blot验证​​：使用特异性抗体检测目标RBP（如hnRNP、lncRNA结合蛋白）；

· ​​质谱分析​​：对富集蛋白进行无偏好鉴定，获取互作蛋白列表及丰度数据。

佐润生物RNA Pull Down服务优势

​​技术精准，经验丰富​​

· ​​双模式检测​​：支持外源性（重组RNA）与内源性（天然RNA）互作研究；

· ​​高灵敏度​​：可检测低至0.5 nM RNA-蛋白复合物，灵敏度较传统方法提升5倍；

· ​​超2万次案例​​：覆盖circRNA-miRNA调控网络、病毒RNA劫持宿主因子等前沿研究方向。

​​数据真实，透明可溯​​

· ​​严格质控体系​​：设置阴性对照（无关探针）、阳性对照（已知互作蛋白），排除假阳性；

· ​​原始数据留存​​：提供未经修饰的Western Blot胶图、质谱原始文件及探针序列；

· ​​客观报告​​：包含互作蛋白列表、GO/KEGG功能富集分析及互作网络示意图。

​​灵活定制，高效交付​​

· ​​样本兼容性广​​：支持哺乳动物细胞、植物、微生物及原代细胞样本；

· ​​快速响应​​：从样本接收到报告交付，全程6-9个工作日；

· ​​售后保障​​：免费提供实验方案优化、数据解读及投稿返修支持。

​​核心应用场景​​

✅ ​​非编码RNA功能研究​​（如lncRNA/miRNA与宿主蛋白互作）

✅ ​​RNA表观遗传调控​​（如m6A修饰介导的RBP招募机制）

✅ ​​病原体RNA-宿主互作​​（如病毒RNA劫持宿主翻译机器）

✅ ​​药物靶点发现​​（如小分子抑制剂阻断RNA-蛋白结合）