杂交瘤技术叉称单克隆抗体技术，在细胞融合技术的基础上，将免疫动物的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行融合，通过HAT及特异性筛选，得到能够分泌特异性识别目标抗原的单克隆抗体细胞株。将细胞株进行体内或体外培养，经过亲和纯化后得到单克隆抗体。

1、服务品牌介绍Service Brand Introduction

IVD Constreambio®(溪利诊断)

• 15年以上生物制药药物研发，工艺开发，GMP生产，质量控制行业经验:掌握诊断原料开发技术全流程能力(蛋白设计及基因工程相关技术平台，瞬转与稳转表达系统平台，纯化和质控技术平台，活性检测和筛选平台)
• 针对诊断试剂，生物试剂客户提供核、心原料配方开发与长期供货商，成为客户犀利的拳头产品。

Biological Constreambio®(溪砥制药)

• 团队有在生物制药行业15+丰富项目经验，主持或参与多个抗体/融合蛋白/CAR-T细胞治、疗药物项目IND申报、BLA申报:
• 拥有新药发现平台(噬菌体展示平台，杂交瘤筛选平台)，药物开发(成药、性评价瞬转/稳转/电转蛋白表达平台，上下游工艺开发平台)，规模化生产(10L,50L，200L500L)不同规模生产能力:
• 做生医药客户背后的中流砥柱，长期成长的陪伴者。

2、服务优势及亮点Service advantages and highlights

上海溪长生物技术有限公司在抗体与重组蛋白一站式服务平台中有独特的技术领、先优势

3、仪器设备展示Instrument and equipment display

4、技术服务平台Technical service platform

4.1杂交瘤抗体发现

杂交瘤技术又称单克隆抗体技术，在细胞融合技术的基础上，将免疫动物的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行融合，通过HAT及特异性筛选，得到能够分泌特异性识别目标抗原的单克隆抗体细胞株。将细胞株进行体内或体外培养，经过亲和纯化后得到单克隆抗体。

                                              杂交瘤筛选

                                杂交瘤细胞无血清培养及驯化技术

                                    杂交瘤抗体测序技术

服务项目案例

一、免疫方案

二、效价检测

三、融合检测

四、抗体亚型&重组抗体表达鉴定

4.2全人源Fab合成文库抗体发现

公司目前具有库容为101的全人源Fab合成文库，未来终、极目标是建立千亿级全人Fab合成文库，致力于为制药公司、诊断试剂公司开发高亲和力、高特异性的候选抗体。

噬菌体文库的构建过程包括提取抗体产生细胞的RNA，转录为CDNA，并通过PCR扩增可变区域形成Fab或者scfv片段。这些片段随后克隆到噬菌体展示载体上，并转化至宿主细菌然后通过辅助噬菌体包装成的噬菌体文库。构建好的噬菌体抗体库就可以进行筛选。噬菌体抗体文库的筛选过程通常包括与目标特定抗原结合、洗脱非特异性结合、收集特异性结合的噬菌体和后续的验证步骤。

                                                          噬菌体文库的构建及筛选流程如图所示。
 

服务项目案例

5.3蛋白表达平台

大规模电转平台

应用领域:抗体/重组蛋白等大分子生物药的研发、临床前研究:ID抗原和抗体原料的生产制备

优势:表达量高:0.1-1.5g/L;产量高:mg/g级别;时间短:2-4周时间

1.超高细胞液处理量

处理液量3-100ml或1.5x10'-1.0x10“个细胞，可扩展。

2.高转染率和高细胞存活率

采用流式电极技术在较低电压下即能产生足够强度的均匀电场，可实现高转染效率(>90%)和高细胞存活率。

3.专用电转缓冲液

专用电转缓冲液在更好地保护细胞、降低细胞死亡率的同时，显著提高细胞转染率。

4.合理的设备及耗材成本

高性价比设备和耗材。

5.Expi 293宿主细胞、Expi CHO-S宿主细胞、CHO-K1宿主细胞pCDNA3.1或pCDNA3.4

服务项目案例
 

4.4稳定细胞株构建

1、CHO-K1 Q宿主及配套载体来源清晰(具有授权)来源于ECACC CHO-K1(野生型)，表达载体pKS001，GS筛选标记(MSX选压力):电转方式(效率达90%或以上);信号肽、筛选标记、密码子优化具有丰富经验:

2、Minipool筛选方式+有限稀释按0.4 cell/孔进行，并在单克隆拍照仪器(CSl，CellMetric CLD,Nyone)进行拍照，追踪单克隆生长图片，完全满足中美申报要求

3、从DNA质粒构建到得到高表达稳定细胞株4-6个月周期，同时满足PDL60细胞株生长表达稳定性与遗传稳定性;

4、抗体、双抗、融合蛋白单克隆细胞株等表达量一般为4.0-8.0 g/L(摇瓶、L和200L反应器表达量一致性较好);

4.5快速成药、性分析

通过基于理论序列、研究实验等手段评价抗体(单抗、双抗)的可开发性，给出风险提示及后续开发建议。

主要包括以下几个主要步骤

1. 根据客户提供的序列，进行Fv区域pl、Hotspots、TAP、Camsol等指标预测分析
2. 使用CHO或者HEK293进行瞬装表达及纯化换液至平台制剂中，初步考察表达量及收率
3. 运用SEC-HPLC、iCIEF、CE-SDS(或SDS-PAGE)、HIC-HPLC、DSF等手段评估分子的纯度、等电点、疏水性、热稳定性等特性。
4. 通过高温稳定性、低pH稳定性、冻融稳定性等评估分子的初步稳定性。

5、其他服务-ADC payload 单克隆抗体制备

背景

ADCs 药物是由单克隆抗体( monoclonal antibody，mAb)、连接子( linker) 和小分子细胞毒素( cytotoxin)构成的多结构域分子。随着ADCs 药物的增多，ADCs 药物的临床免疫原性风险越来被行业高度重视。ADCs 药物的中和抗体检测方法的设计和开发不同于常规抗体类药物，且具有较大的挑战。

抗体用途

◆抗抗体药物偶联(ADC)的小分子细胞毒素(cytotoxin)的单克隆抗体，可用于对ADC药物进行PK分析以及偶联DAR值定性分析

◆为ADC药物开发提供关键抗体试剂，加速ADC药物的研发进程。特点及优势

◆独特性强:基于内部特有的抗原-抗体制备技术，研发出高亲和力、高特异性、高灵敏度和高稳定性的抗ADC payload单克隆抗体;

◆效果好:抗ADC小分子细胞毒素的单克隆抗体，溪长生物已经给多家国内头部ADC药物公司提供服务，产品在实验数据检测上效果好;

◆平类齐全:DM1，MMAE，SN-38，Dxd，伊喜替康及布地奈德等常用的毒素及激素以及客户经过改构后的特殊paylaod;

◆应用广:可以识别抗体药物偶联的小分子部分，可以检测抗体和小分子毒素的偶联值以及动物实验和人体临床实验需要的PK/PD血样检测。

6、CHO细胞HCP定制开发Customized developmentof CHO cell HCP

1.引起免疫原性

PLBL2,PRDX等外源蛋白可能导致免疫原性风险

2.潜在的降低药物活性

具有蛋白酶活性的，如Cathepsins等，可能降解蛋白

3.产品降解

脂肪酶家族的HCP，如PPT1.LPLA2等，可能降解制剂Buffer吐温20/80

7、ADA抗体定制开发DA antibody customization development

药物的免疫原性是指药物和/或其代谢物诱发对自身或相关蛋白的免疫应答或免疫相关事件的能力。随着国内新药，尤其治、疗性蛋白药物研究与开发日益增多，免疫原性相关研究越来越

根据FDA新发布的指导原则，药物免疫原性的评估是基于风险评估的整体性研究，通常贯穿生物技术药物研发的整个过程直至上市后。因此，药物免疫原性的研究需要在临床前与临床研究阶段持续开展，是临床前与临床开发的重要组成部分。药物的免疫原性可以诱发机体产生抗药物抗体(Anti-Drug Antibody，ADA)和/或中和抗体(Neutralizing Antibody，NAb)。溪长生物基于已有的杂交瘤平台，能够为客户快速高效定制开发ADA检测相关的阳性对照抗体。

动物实验资源:

上海溪长生物技术有限公司合作实验室除有斑马鱼、裸鼠、小鼠和大鼠等实验动物评价平台外，还建立了大型动物(巴马系小香猪、恒河猴、羊驼、犬)的实验平台。可利用大型实验动物开展心肌缺血或缺血-再灌注损伤、挤压伤、自身免疫性疾病等的研究，以及肿瘤模型药效评价和预毒理实验评价等。尤其在抗体药物、ADC药物、双抗药物、CAR-T细胞治、疗药物、基因治、疗药物等药效、预毒理实验具有丰富经验。