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通过噬菌体展示技术进行抗体亲和力成熟是一种常用的方法。包括以下主要步骤:
1. 通过简并引物随机化目标抗体的CDR区。
2. 文库构建,库容大于109,尽可能覆盖抗体的多样性;
3. 生物淘选:根据抗原的特性,选择固相筛选或者液相筛选,并进行3-4轮筛选;
4. 鉴定:通过ELISA或者流式检测候选抗体,选择出具有高亲和力和特异性结合能力的抗体进行测序及表达纯化
5. 亲和力测定:利用SPR技术进行亲和力测定
通过噬菌体文库进行抗体亲和力成熟的过程充分利用了噬菌体和宿主细胞的复制机制,通过循环筛选可以逐渐提高抗体与目标抗原的亲和力。这种方法具有高通量、灵敏度和快速验证的优点,被广泛应用于抗体工程、药物开发和生物学研究领域。
流程及报价:
| 服务项目 | 具体内容 | 时间 | 价格 | 结果 |
| 抗体的亲和力成熟设计 | 抗体序列分析 随机化引物设计 | ~2-3天 | 面议 | CDR随机化引物 |
| 亲和力成熟文库构建 | 引物合成 文库片段及载体制备 连接及转化 QC | ~3-4周 | 面议 | CDR随机化的噬菌体文库 |
| 噬菌体文库筛选 | ~3-4轮筛选 候选克隆鉴定 亲和力ranking 测序及序列分析 | ~4-8周 | 面议 | 十几-几十个候选克隆序列 |
| 候选抗体原核表达纯化 | 原核表达 亲和纯化 | ~2-3周 | 面议 | 纯化的抗体 |
| 纯化抗体的活性鉴定 | 抗原结合及亲和力检测 细胞结合及EC50检测 | ~2-3周 | 面议 | ~4-5个候选分子及报告 |
