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产品简介:
重组λ蛋白磷酸酶 (Recombinant Lambda Protein Phosphatase) 是一种锰离子(Mn2+)依赖的重组表达纯化的磷酸蛋白酶,可以对磷酸化的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和组氨酸残基进行脱磷酸反应。重组λ蛋白磷酸酶是大肠杆菌表达的带His标签的含有221个氨基酸残基重组蛋白。
重组λ蛋白磷酸酶可以用于蛋白的去磷酸化,从而可以用于研究蛋白磷酸化与其活性和结构的关系,以及验证蛋白磷酸化位点抗体的特异性等。
酶活性单位定义:在30℃ pH7.5条件下反应1分钟,能够水解1nmol p-nitrophenyl phosphate所需的酶量定义为一个活性单位。
使用说明:
1. Lambda Protein Phosphatase对不同蛋白的脱磷酸化反应有不同活性,所以在实际应用中,建议对酶浓度和反应时间进行优化。反应体系中,反应缓冲液为1× Lambda Protein Phosphatase Buffer并且同时加入1× MnCl2 (最终浓度为1mM)。
2. 以一般的去磷酸化反应为例:在50μl反应体系中,100U的Lambda Protein Phosphatase在30分钟内可以除去相当于5μM的磷酸化的蛋白(单磷酸化)中约100%的磷酸。
注意事项:
1. 避免反复冻融,为方便后续使用建议适当分装后保存。
2. 相关抑制剂:10mM钒离子 (vanadate ions) 能抑制Lambda Protein Phosphatase活性约90%,50mM EDTA可以抑制Lambda Protein Phosphatase活性约95%,1% Triton X-100、0.4% Nonidet P-40、0.025% Tween 20、0.5M NaCl、0.1mM ATP、10μg/ml pepstatin A、10μg/ml leupeptin, 10μg/ml aprotinin, 0.5mM PMSF、1mM benzamidine不影响Lambda Protein Phosphatase的酶活性。
3. 该酶的最佳反应温度是30℃。
4. 某些样品的粗提液中使用该酶进行去磷酸化处理时,请缩短操作时间,同时添加适量蛋白酶抑制剂以减少目的蛋白的降解。