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收藏基本信息:
分子量:约27 kDa
纯度:≥95%(by SDS-PAGE & HPLC)
来源:大肠杆菌表达
外观:无菌无色液体
比活力:20U/μl
储存缓冲液:25mM Tris-HCl,150mM NaCl,0.5mM EDTA,1mM DTT,50% (V/V) Glycerin, PH8.0
酶活定义:在1× HRV 3C Buffer(25mM Tris-HCl, pH7.0, 150mM NaCl, 0.5mM EDTA , and 1mM DTT)中,4℃反应16小时,能够切割100µg的GST标签的融合蛋白达95%以上所需的酶量定义为一个活性单位
操作步骤:
1.在50ul 反应体系中,加入一定量1xHRV 3C Buffer,100ug融合蛋白,1ul HRV 3C Protease,最后用1xHRV 3C Buffer补足到50ul(实际使用时,建议对酶和标签蛋白的比例进行适当优化)。
2.在 4°C 恒温反应 16 小时后,取 20 μl 上述反应液,置于单独的 EP 管中。
3.向上述 EP 管中各加入 20 μl 2X SDS Loading Buffer,样品煮沸 5 min,取 10 μl 进行 SDS-PAGE 分析。
产品描述:
重组HRV 3C蛋白酶(PreScission Protease)是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶。蛋白分子量27kDa,具有His标签,易于通过Ni-NTA树脂去除。
重组HRV 3C蛋白酶是一种大肠杆菌中重组表达的人鼻病毒14型的3C蛋白酶 (human rhinovirus (HRV) type 14 3C protease),也称HRV 3C Protease或HRV3C Protease,能在低温条件下(4°C)特异性地识别八肽序列(Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro)或核心五肽序列(Leu-Phe-Gln-Gly-Pro),并在Gln和Gly氨基酸残基之间进行酶切,常用于去除融合蛋白中的GST、His或者其它标签的蛋白酶。
建议把GST或His等标签设计在融合蛋白的N端,在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入PreScission Protease 专一性识别与酶切的上述八肽序列,这样在GST或His标签被酶切后,在目的蛋白的N端仅有两个额外的Gly-Pro氨基酸残基,从而最大限度地减少了对其结构和功能的影响。
注意事项:
1. 该酶在低温条件下使用(4℃)
2. 100mM ZnCl2、4mM AEBSF和100μM Chymostatin会抑制PreScission Protease的酶活性50%以上。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。