细胞样本多为单一细胞类型（贴壁或悬浮），无复杂结缔组织，细胞间连接松散，只需简单裂解就能释放蛋白，且杂质较少，提取难度低、重复性好。

组织样本是由多种细胞、结缔组织（如胶原、纤维）组成，细胞被紧密包裹在组织基质中，且含有更多脂肪、核酸等杂质，需要先破碎组织、分散细胞，才能充分裂解释放蛋白，提取难度更高。

细胞和组织的结构差异，决定了后续如何处理样本、如何高效裂解，这是实验成败的关键。

细胞样本（贴壁/悬浮）提蛋白流程的核心是避免细胞提前破裂、蛋白降解，同时保证裂解充分。

样本收集：贴壁细胞需用胰酶温和脱壁（37℃孵育1-2分钟，细胞变圆脱落即终止），悬浮细胞直接离心收集；两者均采用800-1000rpm离心5分钟，弃上清，用预冷PBS冲洗2-3次，去除培养基残留，收集细胞沉淀。

蛋白裂解：向细胞沉淀中加入预冷的RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂，现加现用），体积根据细胞量调整；用移液器轻轻吹打，使裂解液充分浸润细胞，冰上静置20-30分钟（期间每10分钟吹打一次），确保裂解充分。

离心取上清：4℃、12000rpm离心10~15分钟，吸取上清液，即为提取的总蛋白；若上清有少量杂质，可再次离心，避免杂带产生。

组织样本提蛋白的核心难点的是“破碎不充分”和“杂质过多”，尤其是致密组织（如肝脏、肌肉），必须做好组织破碎和杂质去除，否则会导致蛋白提取量低、杂带多。

样本预处理：取新鲜组织（避免反复冻融，否则会导致蛋白降解），用生理盐水冲洗，去除血液、脂肪等杂质，剪成1-2mm的细小碎片（碎片越细，后续裂解越充分）；若样本需长期保存，可放入液氮快速冷冻，-80℃保存，使用时解冻后立即处理。

组织破碎：将组织碎片放入离心管，加入预冷的RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂），根据组织量调整体积；用组织研磨器或超声破碎仪破碎组织（超声破碎时，功率不宜过高，每次30秒，间隔1分钟，重复3-5次），直至组织碎片完全分散，无明显颗粒。

蛋白裂解与去杂：将破碎后的组织悬液冰上静置30-40分钟（期间每10分钟轻轻颠倒离心管一次），确保蛋白充分释放；4℃、12000rpm离心15~20分钟，吸取上清液；若上清液浑浊（杂质过多），可加入适量核酸酶，37℃孵育15分钟，再次离心，去除核酸杂质。