明明跟着流程一步步做，但结果要么核染过深糊成一团，要么质染过浅毫无对比；要么切片脱片功亏一篑，要么背景脏乱没法用于论文配图……

作为组织形态学研究、病理诊断、药物研发毒理评价的“金标准”，HE染色（苏木精-伊红染色）在科研与临床诊断中应用极为广泛。

实验结果的成功，源于对技术细节的把控：脱蜡的温度、染色的时长、分化的力度，甚至水洗的速度，都会影响切片质量。

今天，我们从技术原理、关键操作、高频技术难题破解展开，吃透每一个技术细节！

HE染色的本质，是利用染料的酸碱亲和性，实现细胞与组织结构的特异性显色，通俗来说就是利用两种不同的染料，给透明的病理组织“穿上彩衣”，能在显微镜下清晰地观察细胞的结构。

▪️ 苏木精：碱性染料，易与细胞核内的染色质与胞质内的核酸结合，使这类结构呈现蓝紫色，核心作用是清晰显示细胞核形态——这是判断细胞完整性、病变与否的关键。

▪️ 伊红：酸性染料，易与细胞内的细胞质、细胞外基质、胶原纤维等结合，使这类结构呈现粉红色/淡红色，主要作用是区分细胞质与细胞核，凸显组织层次。

当这两种颜色交织在一起，一张“蓝核红质”的微观画卷就呈现了出来。

· 切片准备：石蜡切片厚度控制在3-5μm，烤片温度60℃，烤片时间30-60min

要点：彻底烘干切片，避免脱片，烤片温度过高会导致组织皱缩，过低则易脱片。

· 脱蜡至水（关键步骤）：二甲苯Ⅰ→ 二甲苯Ⅱ→ 无水乙醇→ 95%乙醇→ 80%乙醇→ 70%乙醇→ 蒸馏水

要点：脱蜡必须彻底，避免残留石蜡导致染色不均。

· 苏木精染色（核染核心）：苏木精染液室温染色5-8min

· 返蓝处理：自来水流水冲洗10-15min，或用0.5%氨水浸泡30s，快速返蓝

要点：返蓝不充分会导致核染偏灰，过度返蓝会增加后续分化难度。

· 分化处理（控色关键）：1%盐酸-乙醇溶液快速分化数秒，水洗终止分化

要点：分化时间宁短勿长，分化后立即用自来水冲洗，避免过度分化导致核染褪色。

· 伊红染色（质染核心）：伊红染液室温染色1-2min

· 脱水透明（封片前提）：70%乙醇→ 80%乙醇→ 95%乙醇→ 无水乙醇Ⅰ→ 无水乙醇Ⅱ→ 二甲苯Ⅰ→ 二甲苯Ⅱ

要点：脱水需循序渐进，避免跳过梯度乙醇，否则会导致切片出现气泡、褶皱。

· 封片与镜检：中性树胶封片，避免气泡产生，室温晾干后，光学显微镜下镜检要点：放大倍数10×、40×，重点观察核质对比与组织形态。

1. 切片脱片

原因：载玻片未做防脱处理；烤片不彻底；组织固定不充分；水洗力度过大；

解决方案：优先使用多聚赖氨酸或APES防脱载玻片；烤片温度60℃、时间60min，确保切片彻底烘干；组织固定用4%多聚甲醛，固定时间4-6h（根据组织大小调整）；水洗时采用“轻柔流水冲洗”，避免直接冲击切片。

2. 背景脏乱、有杂质

原因：脱蜡不彻底；染液有杂质；操作环境不洁净；封片有气泡；

解决方案：定期更换二甲苯和染液，染液使用前用滤纸过滤；操作时保持实验台洁净，避免灰尘混入；封片时缓慢滴加中性树胶，从切片一侧慢慢覆盖，避免产生气泡。

3. 核染过深，细胞核呈深黑色，轮廓模糊

原因：苏木精染色时间过长；盐酸酒精分化不足，未去除多余染液；返蓝过度

解决方案：缩短苏木精染色时间，根据组织类型调整至3-8min；延长分化时间至5-8s，分化后立即水洗；返蓝用自来水流水冲洗即可，避免使用氨水过度返蓝。

4. 质染过浅，核质对比不明显，无法清晰观察

原因：伊红染液浓度过低、染色时间不足；脱水时乙醇脱色过度；

解决方案：将伊红染液浓度调整至0.5%，染色时间延长至2-3min；脱水时严格遵循梯度乙醇，每个梯度停留1-3min，避免跳过梯度导致细胞质脱色。

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