制作原理

TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease) 技术是基于对DNA识别的TALEN臂和人工改造的核酸内切酶的切割域(FokⅠ)的结合对细胞基因组进行修饰而实现的。TALEN的DNA识别域是由一些非常保守的重复氨基酸序列模块组成，每个模块由34个氨基酸组成，其中第12和13位的氨基酸种类为可变的（RVDs），且决定了该模块识别靶向位点的特异性。通过DNA识别域结合到靶位点上，以及FokI的切割域形成二聚体后，可特异性对目标基因DNA实现切断。在非同源末端连接修复过程中，DNA双链断开后会由于碱基的随机增减造成目标基因功能缺失。 该技术目前已成功应用于植物、细胞、酵母、斑马鱼及大、小鼠等各类模式动物的研究领域。

TALEN技术特点

1、可以应用于大小鼠，无动物品系限制；

2、修饰效率可达90%以上；

3、实验周期短、价格低。

TALEN基因敲除常用大小鼠模型

完全性基因敲除鼠

TALEN完全性基因敲除是通过TALEN基因敲除技术，针对靶基因设计和构建TALEN质粒，造成目的基因的功能区域移码突变，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的大小鼠模型。

 建系原则与流程

1、TALEN技术获得的基因敲除鼠，由于是在大鼠或者小鼠的原核受精卵期进行的修饰，获得的F0鼠一般是杂合子，并且每只FO鼠由于移码突变情况可能不一样，所以每只F0鼠需要作为一个独立的谱系进行传代；

2、原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子鼠，F0代杂合子鼠与野生型鼠进行交配，获得测序鉴定阳性的F1代杂合子鼠（可能有多种突变类型的F1）

基因敲入鼠

TALEN 基因敲入鼠是利用TALEN基因敲入技术，针对靶基因设计、构建TALEN质粒和donor vector，通过FOKI二聚体的切割作用和同源臂的同源重组，引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型) ；或将报告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因来跟 踪目标基因的表达；也可以用报告基因取代大小鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。
TALEN基因敲入鼠包括点突变、小片段基因敲入。