传统的基因打靶技术制备基因敲除（Knock out）/敲入（Knock in）小鼠是建立在DNA同源重组与胚胎干细胞等技术基础上的分子生物学技术。

同源重组是指当外源DNA片段与宿主基因组片段同源性高时，同源DNA区部分可与宿主DNA的相应片段发生交换（即同源重组）。

基因打靶就是通过同源重组技术将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的。基因打靶技术目前已被广泛认为是一种理想的特定修饰与改造生物体遗传物质的最佳方法。尤其是条件性和诱导性基因打靶系统的建立，使得对基因在时间和空间上的靶位修饰更加明确、效果更加精确可靠，该技术的发展已经为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究和治疗手段，并已显示出巨大的应用前景及商业价值。

建系原则与流程

1、嵌合体小鼠鉴定：通过毛色判断嵌合体（黑白相间） ，黑色占的比例越大，嵌合率越高。

2、去除抗性基因 Neo：选择嵌合率高的嵌合体小鼠和Flp deleter小鼠杂交，PCR鉴定，获得去掉打靶载体中的 Neo 基因的F1 代（杂合子）；

3、再挑选一对F1 代小鼠进行自交，通过 PCR 鉴定筛选得到去除Neo的纯合子的 F2 代 KO 小鼠（gene-/-）。

**PCR 鉴定引物设计原则：根据Neo基因前后设计鉴定引物，鉴定Neo基因是否去除。

建系原则与流程

1、嵌合体小鼠鉴定：通过毛色判断嵌合体（黑白相间） ，黑色占的比例越大，嵌合率越高。

2、去除抗性基因 Neo：嵌合体小鼠和Flp deleter小鼠杂交，PCR鉴定，获得去掉打靶载体中的 Neo 基因的F1 代（杂合子）；

3、挑选一对F1 代小鼠进行自交，通过 PCR 鉴定筛选得到去除Neo的纯合子的 F2 代 KI 小鼠。

**PCR 鉴定引物设计原则：根据Neo基因前后设计鉴定引物，鉴定Neo基因是否去除。