| LunaGel™细胞回收试剂盒

LunaGel™细胞回收试剂盒是一种经过全面优化的即用型解决方案，含有一种酶裂解试剂和缓冲液，在37℃下孵育1小时内，即可在不破坏细胞功能的情况下可以从水凝胶中回收活细胞。

一些实验室技术需要将细胞从三维细胞培养的水凝胶基质中释放出来，以便进行有效的处理和实验分析。该产品用于从LunaGel™光交联细胞外基质中回收有活力的细胞、球状细胞或器官，用于下游应用，如再播种、核酸提取、流式细胞仪、蛋白质提取、单细胞分析等等。

工作原理

在下面的研究中，我们证明了不同硬度的LunaGel™光交联细胞外基质的有效消化，以释放具有高活力的乳腺癌细胞。

材料和方法

细胞包封-上皮乳腺癌细胞（MDA-MB-231）包封

在LunaGel™-牛骨明胶（低刚度试剂盒;凝胶组学猫。无SKU0005），密度为5×106细胞/ mL水凝胶和不同的机械刚度（2，4和6 kPa），在48孔板中遵循LunaGel™细胞封装方案。在细胞恢复前，在补充有10%（v / v）胎牛的Dulbecco改良鹰培养基中培养细胞丰富的构建体3天。

活死体检测

在细胞回收之前，使用荧光素二乙酸酯（FDA）和碘化丙啶（PI）的活/死染色评估LunaGel™ ECM中MDA-MB-231细胞的活力。使用ImageJ对活细胞（绿色）和死细胞（红色）进行定量。

将细胞回收

LunaGel™细胞回收试剂溶解在5ml细胞回收缓冲液中，以产生10倍储备溶液。在细胞回收当天，用恢复缓冲液稀释10x细胞回收溶液并加热至37°C。除去细胞培养基后，向每个样品中加入1ml细胞回收溶液，并在37°C下孵育30分钟。通过确定随时间推移的重量减轻来评估分别具有 2、4 和 6 kPa 弹性模量的含有细胞的 LunaGel™ECM水凝胶的消化。将含有回收细胞的所得悬浮液转移到离心管中，用细胞培养基稀释，并以250 × g离心至沉淀细胞。将细胞重悬于新鲜培养基中，并使用台盼蓝染色测定细胞活力。然后将细胞重新铺板到24孔板中以评估细胞附着和增殖。

结果

通过测定在2°C下与LunaGel细胞回收溶液孵育4分钟内的水凝胶样品重量损失，评估分别具有6、30和37 kPa弹性模量的LunaGel™ECM水凝胶的消解。与构建体刚度无关，样品在25分钟内完全消解（图 2）。

LunaGel™ECM水凝胶细胞恢复前后细胞活力的定量分析在使用LunaGel™细胞回收溶液孵育后显示出出色的细胞存活率（图3 a和b）。为了研究回收的细胞是否仍然起作用，将释放的细胞接种在组织培养塑料上并培养过夜。从所有LunaGel™ECM僵硬度组释放的细胞很容易附着并显示出健康MDA-MB-231细胞的形态特征（图3c）。

结论

LunaGelTM细胞释放试剂盒是一种易于使用的现成解决方案，可在不破坏细胞功能的情况下从水凝胶中回收活细胞。