小鼠胚胎移植技术是小鼠净化、制备基因修饰动物及其他胚胎操作工作的关键技术。按照胚胎发生的阶段不同，移植部位也不同，一般分为输卵管移植和子宫移植。本次主要介绍输卵管移植。

小鼠胚胎移植简介

01、什么是小鼠胚胎移植

小鼠胚胎移植是指将雌性小鼠的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到生理状态相同的假孕雌鼠体内，使胚胚继续发育为新个体的技术。

提供胚胎的个体称为——供体

接受胚胎的个体称为——受体

02、胚胎移植技术的优势

可以充分发挥雌鼠繁殖能力；

缩短供体雌鼠的繁殖周期；

增加供体雌鼠繁殖后代的数量。

03、小鼠胚胎移植的用途

动物净化——净化小鼠，提高小鼠的微生物等级。

快速扩繁——在短时间内大量扩繁出生日期相同且克重均一的小鼠，可节省时间和空间成本。

显微注射——经过基因编辑的胚胎，需要通过胚胎移植才能发育成活体小鼠。

辅助生殖——解决由于生殖缺陷，不能正常繁殖的小鼠，通过体外受精和胚胎移植技术帮助扩繁出后代。

精子复苏的移植验证——验证精子冻存或复苏是否成功。

胚胎复苏的移植验证——验证胚胎冻存或复苏是否成功。

小鼠胚胎移植操作

01、准备假孕鼠

用切除输精管的雄性ICR小鼠和雌性ICR小鼠交配，可诱导产生用于输卵管移植的假孕鼠。与不孕鼠交配后，尽管其自身产生的卵母细胞已经退化，但其子宫处于胚胎移植的接受状态。常用的交配方法有结扎雄鼠和发情雌鼠1:2合笼，过夜合笼后第二天在雌鼠阴道口检栓块。

挑发情方法

通过检查阴道的颜色、湿润度和肿胀程度来鉴定发情雌鼠，特征是红、肿、潮。

挑见栓方法

由于老鼠交配在半夜进行，因此检栓工作最好在第二天中午之前完成。如若见栓，取出见栓雌鼠待用。阴道栓由雄鼠精浆中的蛋白质凝固形成，有时由于阴道栓很小，位于阴道深处，需借助钝性器械（常用眼科镊）才能看到。

将准备好的假孕鼠称重，先注射止痛剂卡洛芬，之后腹腔内注射麻醉剂进行麻醉。剃毛区域为小鼠肋骨以下，后肢根部以上。

02、制作移植针

输卵管移植使用的毛细玻璃管，每根移植管的内径都应大于1个二细胞期胚胎的直径而小于2个二细胞期胚胎的直径。

制作步骤如下： 

双手捏住毛细玻璃管的两头。置于酒精灯外焰煅烧至玻璃管软化，迅速离开火焰，水平拉长毛细管。

用小砂轮截取一定长度，并用火焰加热截断后的细玻管口。

加热目的是为了使断截口光滑圆润，不至于损伤细胞和输卵管

左：不平的针口（次品）；中：烧过的针口（成品）；右：未烧过针口（半成品）

03、获得二细胞期胚胎

胚胎的来源主要有体外受精实验、胚胎复苏实验以及自然合笼后冲取输卵管获得的二细胞。

胚胎从KSOM中转移到M2中，更换移植针，从没有石蜡油的一侧液面吸取胚胎。一侧输卵管移植8~15枚胚胎。

04、迁出卵巢、输卵管、子宫部位

背部剃毛备皮，酒精消毒后做正中纵向切口，用眼科镊夹住卵巢上的脂肪垫，轻轻拉出卵巢、输卵管以及部分的子宫，用脂肪夹固定脂肪垫。

05、胚胎移入输卵管内

将准备好的假孕鼠横向放置于显微镜底座上，调整显微镜倍数、假孕鼠位置以及外光源亮度和照射范围，使视野下清晰的看到输卵管的膨大部位置。

距离膨大部至少2个转弯处用注射器戳开一个小口，将移植管从开口处进入，针与输卵管平行进入膨大部，将受精卵吹进膨大部，略停片刻再拔出。把卵巢、输卵管和子宫放回小鼠的腹部，用伤口缝合器缝合伤口。

06

术后护理及等待小鼠出生

移植5天后需每天观察小鼠状态。移植后19天后仔鼠出生。需注意临产前3天笼盒内添加足量饲料，水，仔鼠出生3天内不可开笼盒，避免母鼠受惊食仔。

参考资料

[1]小鼠生殖工程学技术 (jinpanbio.com)

[2]《小鼠胚胎操作实验手册》（原著第三版）