一、什么是高通量基因敲除？

• 高通量基因敲除是利用CRISPR/Cas9 RNP敲除技术，配合自动移液工作站平台进行大规模、高效的基因编辑实验。高通量基因敲除在新药靶点发现、大规模基因功能研究等前沿领域具有巨大潜力，为药企和科研客户提供了一个高度灵活且可定制的基因编辑平台。

二、如何实现高通量基因敲除？

• 高通量基因敲除是通过采用RNP法(Cas9与sgRNA形成复合物）替代传统的慢病毒和质粒法，结合自动化移液工作站和高效电转化平台，实现从低通量到高通量的基因敲除技术与产能的发展。同时，运用生物信息学方法优化gRNA设计，提高编辑效率并降低脱靶风险。
• 目前已有超过上千篇文章在使用RNP基因敲除方法，并逐年增加中，该方法已然在替代慢病毒法和质粒法，成为高通量基因敲除的优选方法。

三、为什么RNP法会成为高通量基因敲除的优选方法？

• 更高的编辑效率：RNP法能够在短时间内实现高效的基因敲除，缩短实验周期；
• 更低的毒性：RNP法避免了病毒及质粒的使用，避免激活细胞内的DNA/RNA sensing通路，降低了细胞毒性；
• 较低的脱靶效应：RNP在细胞体内72小时内可被降解，相较于传统方法具有更低的脱靶风险；
•  更简便的实验操作：RNP法简化了实验流程，节省了实验时间和成本；
• 更快的实验周期：由于高编辑效率和简便的操作，RNP法能够显著缩短整个实验周期。
• 高通量基因敲除使得基因敲除形成以下3大趋势：
  01. 阵列ArrayKO库取代混合KO库；
  02. RNP法逐步取代慢病毒和质粒法；
  03. 高敲除效率KO pool替代KO cell line。

四、粒曼高通量RNP基因敲除的优势

• 适用于人和小鼠两个物种的免疫细胞、iPS细胞、300+常见肿瘤细胞系等细胞类型，满足不同客户的需求；
• 粒曼采用高效RNP基因敲除技术构建KO细胞系。我们的技术能在3-5周内获得编辑效率超70%的KO细胞池(KO Pool), 在6-8周内获得100%敲除效率的KO细胞系(KO Cell line)。
• 提供300+肿瘤细胞大规模蛋白质组学数据支持：靶基因在靶细胞中是否表达，帮助客户选择 最合适的细胞系用于敲除。

• 提供大量生物信息学数据支持基因必要性分析，帮助客户更好地理解基因功能以及推荐KO/KD方案，评估基因敲除前的实验风险；
• 人全基因组19883个基因gRNA已全部完成验证，确保高效且准确的基因敲除；粒曼的人全基因组敲除阵列文库已在人原代细胞中通过高内涵筛选验证，超过80%的靶点实现了70%以上的敲除效率。

• 粒曼CRISPR编辑方法低毒性，超高的编辑效率。

独有的KO基因型和蛋白表型分析方法。行业内唯一执行KO效率"Sanger测序＋蛋白质组学“ 双重质控标准，中国典型培养物保藏中心(CCTCC)指定"KO细胞战略合作伙伴"。

粒曼CRISPR可以有效在iPSC分化的巨噬细胞中编辑iPSC分化的巨噬细胞基因敲除并不影响细胞表型。

团队超过22,000+次的基因敲除经验，粒曼拥有自动化、高通量基因敲除标准化生产平台，实现每月400+高敲除效率KO细胞的产能，成为行业内具备短期交付2,000+大规模基因敲除细胞产品能力的国内基因编辑细胞供应商。

粒曼生物·服务流程

服务报告交付内容：

1. 基因敲除实验报告（含实验方案描述，敲除效率验证报告，Sanger测序文件等）；
2. 提供1株冻存细胞（1*106/管）或1瓶T25活细胞；
3. 基因敲除细胞系保证100%敲除的单克隆纯合子（所有等位基因都不存在野生型基因）；
4. 蛋白质水平验证（WB/蛋白质组学）需额外收费。

其他配套产品及服务：

• 靶基因在目标细胞内的表达鉴定：深度蛋白质组学分析
• 靶基因在目标细胞内的必要性分析：Essential score (ES）分析
• 靶基因敲除效率分析：Sanger测序基因分析（免费配套）+蛋白质组学分析（可选服务）双重保障
• 诱导性shRNA基因敲低稳定细胞系构建服务（ES 值 >0.5 选择KD方案）