概述

       DNA含量分析在流式细胞检测中，占有相当大的比例。通过这种方法，研究者可以进行抗癌药物的毒性评估，并对恶性肿瘤细胞的预后效果及进展程度进行分析。在细胞周期检测中，DNA含量也同样作为重要的分析手段而被广泛应用。通过细胞DNA含量的测定，可计算各细胞周期的百分率，也可通过DNA片段化检测、DNA双染标记等方法检测细胞凋亡。 
       PI/RNase Staining Solution，可快速完成细胞周期的分析，操作简便。本产品使用碘化丙啶 (Propidium Iodide) 作为DNA荧光染料，通过流式细胞术得到细胞周期中G0/G1，G2和S期细胞的比例。

产品组分

在上述条件下，可稳定保存1年

实验范例

Jurkat细胞用冷70%乙醇固定，并用PBS洗涤两次。 用500ul PI/RNase染色液在37℃下避光孵育30分钟后，通过流式细胞仪上机检测。

操作流程

1. 细胞收集
    悬浮细胞: 300g，5min离心收集细胞。 
    贴壁细胞: 用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后，用预冷的PBS清洗1次，300g，5min离心收集细胞。
    将细胞密度调整为0.5-1×106 cells/ml。

2. 细胞固定
    弃上清，在涡旋振荡器低速搅拌下，逐滴加入1 ml  -20℃保存的70%乙醇，使细胞均匀分散，4℃固定2h或过夜（可4℃放置1周再染色，信号无显著变化）。

3. 乙醇洗脱
    300g离心5min弃乙醇后（如细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍加大离心力）， 用≥1 ml 预冷的PBS重悬细胞，重复清洗细胞2次。确保无乙醇残留。

4. PI染色
    弃上清，向每个样品中加入500ul  PI/RNase Solution充分重悬细胞，37℃避光孵育30 min。

5. 流式上机
    用滤网过滤，以去除样品中的细胞团块。上机时用低流速、线性放大检测PI-A（PE通道），推荐收集20000个细胞。必须设门去除黏连体（PE-A vs PE-H）,否则G2/M比例虚高。FSC-H）,否则G2/M比例虚高。